背景[1-3]
胸腺素Β10抗體是可以特異性結(jié)合胸腺素Β10的一類多克隆抗體，主要用于檢測(cè)胸腺素Β10的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中胸腺素Β10水平。用純化的胸腺素Β10抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胸腺素Β10，再與HRP標(biāo)記的胸腺素Β10抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胸腺素Β10呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中胸腺素Β10濃度。
胸腺素β10（Tβ10）是胸腺素β家族成員。與Tβ4一樣,Tβ10也是與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)的肌動(dòng)蛋白隱蔽蛋白。研究發(fā)現(xiàn)Tβ10可能與某些腫瘤行為,如細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等相關(guān)。
目前細(xì)胞中Tβ10作用的分子機(jī)制尚不明確。有研究表明,Tβ10有差別地表達(dá)于胚胎發(fā)生和神經(jīng)發(fā)育過程中,在炎癥及腫瘤發(fā)生時(shí)其表達(dá)量也有所上調(diào),甚至過表達(dá)。研究表明Tβ10表達(dá)改變與乳腺癌、食管癌、肝癌、膽管癌、卵巢癌等惡性腫瘤關(guān)系密切。根據(jù)癌癥類型的不同，Tβ10呈現(xiàn)出不同的表達(dá)狀態(tài)，而且具體作用機(jī)制尚未明確。
應(yīng)用[4][5]
用于GRα調(diào)控Tβ10致豬骨骼肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的研究
應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)應(yīng)激激素大量分泌,其中以皮質(zhì)醇為主,它是影響肉質(zhì)的一個(gè)較為重要的因素。課題組前期研究表明,在動(dòng)物日糧飼喂過程中添加皮質(zhì)醇會(huì)導(dǎo)致仔豬背最長肌肌肉組織受損嚴(yán)重,肌纖維間隙增大,凋亡細(xì)胞數(shù)增多。
但目前關(guān)于應(yīng)激激素是如何影響肉質(zhì)以及通過何種方式導(dǎo)致肉質(zhì)發(fā)生變化的機(jī)制并不完全清楚。現(xiàn)今研究表明糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)主要通過細(xì)胞膜與體內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)結(jié)合發(fā)揮一系列調(diào)控作用。
GRα靶基因的篩選干擾GRα后根據(jù)表達(dá)差異篩選GRα的靶基因,定量結(jié)果顯示,干擾GRα后極顯著下調(diào)Tβ10的表達(dá),下調(diào)HSP90和HSP27的表達(dá);且超表達(dá)GRα后Tβ10的表達(dá)顯著升高,上調(diào)HSP90和HSP27的表達(dá),且在網(wǎng)站上預(yù)測(cè)出GRα與Tβ10的結(jié)合位點(diǎn)。
因此推測(cè)Tβ10可能是GRα的靶基因,雙熒光素酶報(bào)告和染色質(zhì)免疫共沉淀等試驗(yàn)初步驗(yàn)證,結(jié)果表明Tβ10可能是GRα潛在的靶基因。構(gòu)建Tβ10超表達(dá)載體后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)Tβ10對(duì)PSC細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果表明:超表達(dá)Tβ10可以促進(jìn)PSC細(xì)胞凋亡。
且通過檢測(cè)細(xì)胞的氧自由基發(fā)現(xiàn)其含量顯著升高,說明細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。通過qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tβ10對(duì)細(xì)胞應(yīng)激與凋亡調(diào)控相關(guān)基因的影響,結(jié)果表明:超表達(dá)Tβ10能促進(jìn)PSC細(xì)胞中BAX、HSP90、HSP27和CAST的表達(dá)。
參考文獻(xiàn)
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