背景技術

二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）屬于合成磷脂，廣泛應用于藥用輔料，適合用于改進制劑處方，并制備成多種多樣的脂質體和磷脂復合物。二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿已應用于Visudyne(維替泊芬脂質體)和Abelect(兩性霉素β磷脂復合物)，已收錄于美國食品藥品管理局非活性藥用成分(輔料)數(shù)據(jù)庫，其質量標準未收載于中國藥典、美國藥典、歐洲藥典中。目前國內外文獻尚無二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）含量測定方法。

二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）一般可通過化學合成法制得。常用的工業(yè)方法使用肉豆蔻酸(十四酸)和磷酸酰膽堿為起始原料，通過縮合反應，并加以提純精制制備。該制備工藝中，肉豆蔻酸為起始原料，也是產物的降解產物。此外，反應中會產生副產物溶血磷脂酰膽堿，同時也是產物降解過程中易產生的化合物。這兩種化合物會干擾二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）含量檢測的準確性。開發(fā)能夠分離二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）和其有關物質的含量檢測方法是非常有必要的。

目前國內外其它磷脂酰膽堿類化合物的含量檢測有TLC法、以紫外檢測器檢測的液相色譜法、以ELSD檢測器檢測的液相正相色譜法等。TLC法無法準確定量檢測，且人為主觀性較大，故含量檢測誤差較大，無法準確的檢測產品含量。因磷脂類化合物幾乎無紫外吸收，故以紫外檢測器檢測的液相色譜法，檢測波長一般選擇190~210nm之間，該檢測波長下流動相所用溶劑等干擾較大，樣品響應值也較低，含量檢測的重復性及準確性都較差。中國藥典中大豆磷脂及蛋黃卵磷脂的質量標準中，磷脂酰膽堿的含量檢測以ELSD檢測器，用硅膠為填充劑的色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇等為溶劑的正相色譜法檢測，該方法對色譜柱及儀器的損害較大。且以上磷脂或磷脂酰膽堿類化合物含量的檢測均未有專門針對二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）的含量檢測。

檢測方法

實驗材料：二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）對照品(Lipoid含量99.6％)、溶血磷脂酰膽堿(江蘇東南納米材料有限公司)、肉豆蔻酸(凌峰化學)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）(江蘇東南納米材料有限公司)、色譜甲醇(TEDIA)、醋酸銨(凌峰化學)。

液相色譜條件：色譜柱采用Agilent Eclipse Plus C18柱(4.6*150mm，3.5μm)；以4mmol/L pH＝4的醋酸銨緩沖溶液為流動相A，以4mmol/L醋酸銨甲醇為流動相B；按下表進行梯度洗脫；柱溫40℃；蒸發(fā)光散射檢測器，溫度70℃，氮氣流速為每分鐘1.8L。

實驗過程：取本品約5mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿對照品適量，用甲醇稀釋制成每1mL中含二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg、0.07mg的溶液作為標準溶液。精密量取供試品溶液和對照品溶液各10μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由標準溶液測得的線性回歸方程計算二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC）的含量。

參考文獻

[1]江蘇東南納米材料有限公司. 一種高效液相色譜測定二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量的方法:CN202011362323.7[P]. 2021-04-09.