背景

木犀草素是一種很具有代表性的天然黃酮，在植物界分布較廣，主要存在于金銀花、菊花中，以糖苷的形式分布于芹菜、紫蘇葉及花生的外殼、忍冬等。木犀草素從乙醇離析出的為含一個(gè)結(jié)晶水的金黃色針狀體，微溶于熱水，難溶于冷水。水溶液呈悅目的淡黃色，可溶于10%氫氧化鈉水溶液，呈深黃色，木犀草素在正常條件下穩(wěn)定。木犀草素具有多種藥理活性，如消炎、抗過敏、降尿酸、抗腫瘤、抗菌、抗病毒等，臨床主要用于止咳、祛痰、消炎、降尿酸、治療心血管疾病、治療“肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥”，SARS，肝炎等。但目前未見木犀草素用于防治神經(jīng)炎癥相關(guān)疾病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種木犀草素的應(yīng)用，該木犀草素可以顯著抑制神經(jīng)炎癥的活性。

神經(jīng)炎癥主要表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞激活，小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)炎癥因子大量釋放，TLR4信號通路的激活，同時(shí)伴隨記憶損傷和認(rèn)知功能障礙。

本發(fā)明提供了木犀草素在制備抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述藥物用于抑制所述小膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)。

優(yōu)選地，所述藥物用于抑制所述小膠質(zhì)細(xì)胞中NO信號分子的產(chǎn)生。

本發(fā)明采用NO試劑盒檢測木犀草素對LPS誘導(dǎo)的小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞NO的釋放的影響。結(jié)果表明木犀草素可顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和小膠質(zhì)細(xì)胞中NO的釋放。

本發(fā)明還提供了木犀草素在制備阻斷TLR4信號通路藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明中，優(yōu)選阻斷TLR4信號通路下游的Myd88蛋白、NF-Kb蛋白和/或MAPK蛋白的表達(dá)，因而木犀草素可以阻斷Toll樣受體4(TLR4)信號通路。

本發(fā)明還提供了木犀草素在制備抑制神經(jīng)炎癥藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述神經(jīng)炎癥為脂多糖誘導(dǎo)的神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥。

本發(fā)明還提供了木犀草素在制備預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述神經(jīng)退行性疾病選自：老年癡呆、帕金森或多發(fā)性硬化癥。

優(yōu)選地，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的輔料。

優(yōu)選地，所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、懸浮劑、分散劑、糖漿劑或注射劑。

從以上技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供了木犀草素的應(yīng)用，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，木犀草素可以抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)NO信號分子的產(chǎn)生，小膠質(zhì)細(xì)胞和TLR4信號通路下游炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)。因此，木犀草素可以顯著抑制神經(jīng)炎癥活性，可用于制備預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病藥物，具有臨床應(yīng)用價(jià)值和開發(fā)前景。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1不同濃度的木犀草素對細(xì)胞活力的影響圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2不同濃度的木犀草素抑制LPS誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)NO的抑制率。

具體實(shí)施方式

為使得本發(fā)明的發(fā)明目的、特征、優(yōu)點(diǎn)能夠更加的明顯和易懂，下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，下面所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而非全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明實(shí)施例BV-2細(xì)胞購買于國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺，木犀草素購買于四川省維克奇生物科技有限公司，NO試劑盒購于碧云天試劑公司，LPS購于Sigma-Aldrich。

本實(shí)施例采用MTT法考察不同濃度的木犀草素對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的活力的影響。

(1)小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2的培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)液以DMEM為基礎(chǔ)，加入10％FBS、1％雙抗(青霉素和鏈霉素)配置。小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2培養(yǎng)在5％CO2，37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，定期在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，當(dāng)細(xì)胞貼壁面積約占培養(yǎng)瓶的70％-80％時(shí)，用胰酶消化細(xì)胞并傳代，之后繼續(xù)培養(yǎng)。

(2)細(xì)胞活力測定

實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在540或720nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

檢測方法：取對數(shù)生長期的BV2細(xì)胞，將細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)，細(xì)胞密度為5000/well，接種量為100ul/well，置于培養(yǎng)箱內(nèi)。24小時(shí)后，取出96孔板，棄去上清液，按實(shí)驗(yàn)組分組，分別換成無血清的DMEM培養(yǎng)液配置的不同濃度木犀草素(25μM、50μM、100μM、200μM)來孵育細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置對照孔(對照組未加入木犀草素)和調(diào)零孔(TL)，每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，置于培養(yǎng)箱中孵育24h。24小時(shí)后取出96孔板，棄去上清液，避光加mtt溶液(濃度0.5mg/ml)，每孔100ul，然后在放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)4小時(shí)。4h后，終止培養(yǎng)，小心吸走孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150ul DMSO，把板子前后左右搖晃數(shù)次，用酶標(biāo)儀測試在570nm的波長處光吸收值，并計(jì)算細(xì)胞活力。

如圖1所示，木犀草素(MXC)在濃度為100μM及以下時(shí)，對細(xì)胞活力無影響，因此可選擇100μM及以下藥物濃度，進(jìn)行藥效驗(yàn)證。