背景及概述[1][2][3]
舍雷肽酶又稱(chēng)沙雷肽酶，早期被人們發(fā)現(xiàn)具有蛋白溶解能力，可抑制致炎物質(zhì)，多被用作化痰去膿藥，同時(shí)舍雷肽酶也具有促進(jìn)細(xì)胞的新生，促進(jìn)傷口的愈合，與抗生素一同使用時(shí)有協(xié)同作用提高抗生素抗菌作用。所以是創(chuàng)傷藥的良好選擇。該酶的發(fā)現(xiàn)者Dr Hans稱(chēng)該酶為“奇跡之酶”，它具有良好的抗炎、抗腫脹、促進(jìn)痰液、膿液溶解與排泄以及鎮(zhèn)痛作用，臨床用于手術(shù)后及外傷的消炎；副鼻竇炎、乳汁潴留性乳腺炎、膀胱炎、附睪炎、智齒周?chē)准把啦勰撃[時(shí)的消炎；以及治療支氣管炎、肺結(jié)核、支氣管哮喘時(shí)痰液不易咳出等。
研究也表明，舍雷肽酶具有出色的纖溶活性，使其在治療動(dòng)脈粥樣硬化方面也有潛在的應(yīng)用。目前舍雷肽酶主要生產(chǎn)菌種是粘質(zhì)沙雷氏菌E15菌株，該菌株是從日本蠶蛹內(nèi)臟中篩選得到，蠶蛹就是利用該酶破壞繭殼，從而化蛹成蛾。粘質(zhì)沙雷氏菌又名靈桿菌，是革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)沙雷氏菌屬 (Serrtia)。該菌的特征在28～30℃下培養(yǎng)產(chǎn)生鮮紅的色素—靈菌紅素(prodigiosin，又稱(chēng)靈桿菌素)；37℃下培養(yǎng)不產(chǎn)生紅色色素，靈菌紅素具有抗菌、抑癌、提高免疫力等生理 活性，具有一定的開(kāi)發(fā)潛質(zhì)。近些年來(lái)，舍雷肽酶在作為藥物在臨床的使用量逐年增長(zhǎng)，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求量非常大，而且售價(jià)較高，國(guó)內(nèi)舍雷肽酶類(lèi)藥物的原料多從國(guó)外進(jìn)口，生產(chǎn)的企業(yè)屈指可數(shù)，也未見(jiàn)相關(guān)發(fā)酵工藝研究的報(bào)道。目前，日本和印度工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模較大，國(guó)際市場(chǎng)多向這兩個(gè)國(guó)家采購(gòu)，所以國(guó)內(nèi)迫切需要開(kāi)發(fā)具自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的舍雷肽酶生產(chǎn)工藝。
規(guī)格[4]
腸溶片： 100μg/5mg。
用法用量[4]
口服： 成人15～30mg/d，分3次餐后服用。
應(yīng)用[4]
本品臨床適用于術(shù)后、外傷的消腫、消炎和鎮(zhèn)痛，以及五官、口腔、乳腺、膀胱、附睪、肺、支氣管炎病人炎癥水腫癥狀的改善。
藥理作用 [5]
本品是沙雷菌所產(chǎn)生的蛋白酶。通過(guò)降解異常滲出物和蛋白質(zhì)以促進(jìn)血管、淋巴管對(duì)分解產(chǎn)物的吸收，改善炎癥病灶的循環(huán)，從而產(chǎn)生消炎消腫的作用。通過(guò)降解和液化粘膜分泌物及纖維凝塊，加速痰、膿和血腫液化與排出。對(duì)纖維蛋白、纖維蛋白原有很強(qiáng)的溶解能力，但對(duì)白蛋白α及γ球蛋白等活性蛋白無(wú)害。連續(xù)使用本品，能促進(jìn)青霉素、氨芐青霉素、磺芐青霉素等抗生素的組織穿透能力，增加抗生素在感染病灶和血中的濃度，增強(qiáng)抗生素的作用。
藥代動(dòng)力學(xué)[6]
口服本藥后，血液及淋巴組織的達(dá)峰時(shí)間約1小時(shí)，維持作用時(shí)間約4-5小時(shí)?？蓮V泛分布于淋巴、支氣管、肺、膀胱、血液等組織及體液中，以淋巴組織中濃度最高。淋巴組織及血液中的濃度一般與劑量成正比，淋巴組織中藥物濃度較血藥濃度持久。本品可在體內(nèi)代謝，主要代謝物及部分原形藥物自尿或糞便中排泄。
不良反應(yīng)[6]
本品偶見(jiàn)以下不良反應(yīng)：過(guò)敏反應(yīng)：如皮疹、瘙癢、皮膚潮紅等；消化道反應(yīng)：如食欲不振、胃部不適、惡心、嘔吐、腹瀉等；其他：如鼻出血、痰中帶血等出血癥狀，以及出現(xiàn)黃疸、谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(γ-GTP)等上升。
注意事項(xiàng)[7]
1. 過(guò)敏性反應(yīng)，有時(shí)出現(xiàn)皮疹，皮膚潮紅等癥狀，出現(xiàn)此等過(guò)敏癥狀時(shí)應(yīng)停藥。
2. 血液凝固異常者、嚴(yán)重肝腎障礙者慎用。
3. 對(duì)高齡患者，由于生理機(jī)能下降，可酌情減少用量。
4. 本品與抗凝血藥合用，有時(shí)會(huì)增加抗凝血藥的作用，應(yīng)注意觀(guān)察，慎重給藥。
藥物相互作用[6]
1. 因本品可強(qiáng)效溶解纖維蛋白和纖維蛋白原，從而增強(qiáng)抗凝藥的作用，所以與抗凝藥聯(lián)合使用時(shí)應(yīng)慎重，已使用者應(yīng)注意密切觀(guān)察。
2. 本品與抗生素類(lèi)藥、化療藥、非甾體類(lèi)抗炎藥并用可引起下列反應(yīng)：皮膚粘膜眼綜合征及中毒性表皮壞死癥，發(fā)生率＜0.1%；間質(zhì)性肺炎、嗜酸細(xì)胞肺浸潤(rùn)綜合征，發(fā)笙率＜0.1%；休克，發(fā)生率＜0.1%。
制備[3]
將粘質(zhì)沙雷氏菌LL-413菌株接種入產(chǎn)酶培養(yǎng)基，于28～32℃、200～250r/min發(fā)酵20～42h，得干菌體濃度為2.67～9.40g/L，舍雷肽酶活力為360.0～1505U/mL的發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)離心后去除菌體，上清液再經(jīng)過(guò)鹽析、透析和冷凍干燥后，即可得到舍雷肽酶；所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基終濃度組成為：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麥芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO4 1g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，初始pH為7.5～8.5。所述粘質(zhì)沙雷氏菌LL-413菌株在產(chǎn)酶培養(yǎng)前，通常需要先經(jīng)斜面活化培養(yǎng)，然后經(jīng)種子培養(yǎng)、獲得種子液再接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，具體步驟如下：(1)將粘質(zhì)沙雷氏菌LL-413菌株接種于斜面培養(yǎng)基，于30℃培養(yǎng)24～36h，得到活化后的斜面菌體；所述的斜面培養(yǎng)基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，初始pH為7.0；(2)將步驟(1)活化后的斜面菌體接種至種子培養(yǎng)基中，于30℃、200～250r/min振蕩條件下培養(yǎng)18～24h，得到種子液；所述種子培養(yǎng)基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，牛肉膏 3g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，初始pH為7.0；(3)將步驟(2)種子液以體積濃度1％～2％的接種量，移種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，于30 ℃、200～250r/min振蕩條件下培養(yǎng)24～42h，得到含舍雷肽酶的發(fā)酵液；所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基終濃度組成為：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麥芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO4 1g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，培養(yǎng)基初始pH為7.5～8.5。
舍雷肽酶粗酶液進(jìn)行分離純化的方法為：將粘質(zhì)沙雷氏菌LL-413菌株發(fā)酵所得的舍雷肽酶粗酶液，經(jīng)過(guò)硫酸銨(NH4SO4) 沉淀、透析除鹽和冷凍干燥后獲得舍雷肽酶。具體的，所述分離純化方法如下：
1)往舍雷肽酶粗酶液中加入硫酸銨，使其飽和度達(dá)到30～45％，4℃沉淀12～ 24h，之后將粗酶液于4℃、8000g條件下離心10min，去除沉淀，保留上清液；
2)往步驟(1)中經(jīng)硫酸銨沉淀后所得的上清液中再次加入硫酸銨，使其飽和度達(dá) 到70～80％，4℃沉淀12～24h，之后將粗酶液于4℃、8000g條件下離心10min，棄去上清液，沉淀物用pH值8.0的Tris-HCl緩沖液溶解，此時(shí)得到舍雷肽酶粗品的濃縮液；
3)將步驟(2)所得濃縮液裝入截留分子量為14kDa的透析袋中，以去離子水為透 析液透析除鹽后，于-40℃冷凍干燥，即得到舍雷肽酶凍干酶粉。
由LL-413菌株發(fā)酵制備的舍雷肽酶的電泳圖，泳道1：標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker；泳道2：舍雷肽酶樣品：
主要參考資料
[1] 溫文勝, 黃光武, 吳鴻泉, 等. 沙雷肽酶對(duì)慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中纖維蛋白分解酶活性的影響[J]. 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2002, 19(6): 827-828.
[2] CN201810231020.8 一種舍雷肽酶外用粉劑及其制備方法
[3] CN201610407429.1 粘質(zhì)沙雷氏菌LL-413菌株及其制備舍雷肽酶的應(yīng)用
[4] 臨床常用藥物
[5] 常用新藥手冊(cè)
[6] 舍雷肽酶腸溶片說(shuō)明書(shū)
[7] 最新全科醫(yī)師用藥手冊(cè)