背景[1-3]
ANTI-HUMAN HGF是以ANTI-HUMAN HGF為抗原的免疫蛋白，可以特異性結(jié)合HUMAN HGF，主要用于檢測HUMAN HGF的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物實驗。
肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor,HGF）最初bai作為一種肝du細胞有絲分裂原是從肝部分切除大鼠zhi的血清中dao分離得到的，隨后相繼從大鼠血小板、人血漿、兔血清中分離、純化，其分子量為82～85kD，屬不耐熱多糖蛋白。HGF主要由間質(zhì)細胞（如成纖維細胞、巨噬細胞等）產(chǎn)生，在鼠、兔、人等的多種組織中表達，調(diào)控細胞生長、分化。
其前體由728個氨基酸殘基組成單鏈,經(jīng)蛋白酶水解作用產(chǎn)生具有生物活性的異二聚體，成熟的HGF蛋白分子由α鏈（分子量為56～69kD）和β鏈（β1：34kD，β2：32kD）通過二硫鍵相連接，其中α鏈含有4個Kringle結(jié)構(gòu)，與纖溶酶原具有38%的同源性。HGF基因約70kb，由18個外顯子和17個內(nèi)含子組成。人和鼠HGF cDNA序列高度保守，其生物學(xué)活性無明顯種屬差異。
HGF通過與特異性膜受體c-met結(jié)合而發(fā)揮其多樣生物學(xué)作用，除促有絲分裂活性外，還作為一離散因子（scatter factor,SF）促進細胞擴散遷移,而且具有獨特的形態(tài)發(fā)生原作用，誘導(dǎo)多種上皮細胞形成分支管狀結(jié)構(gòu)，包括腎小管上皮細胞。
HGF/c-met是發(fā)育過程中不可缺少的調(diào)控物，HGF基因敲除(gene knockout)或c-met基因突變均會引起個體發(fā)育的異常和表型的改變。許多研究證實，HGF/c-met在組織器官損傷后的再生時發(fā)揮重要作用。
腎臟是HGF受體c-met表達最高的器官之一，事實上不管是胚胎還是成年動物，HGF/c-met均參與腎臟多種生理病理過程的調(diào)節(jié),包括腎臟發(fā)育、代償性腎生長、急性損傷后腎小管的修復(fù)與再生等。
應(yīng)用[4][5]
用于GC-MSCs旁分泌HGF對胃癌生長作用及機制研究
胃癌間質(zhì)干細胞(gastric cancer mesenchymal stem cells,GC-MSCs)能通過旁分泌作用促進胃癌進展,并且GC-MSCs較骨髓MSCs(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)高分泌肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)。HGF已被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中異常表達,且與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移及血管形成相關(guān)。因此本研究旨在探討GC-MSCs來源的HGF在胃癌細胞增殖、遷移及腫瘤形成中的作用,以及對腫瘤細胞程序性死亡受體-配體1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表達的影響。
方法:采用組織貼壁法從胃癌患者腫瘤組織和健康人骨髓中原代分離培養(yǎng)GC-MSCs和BM-MSCs并收集其細胞培養(yǎng)上清(culture medium of GC-MSCs,GC-MSCs-CM,culture medium of BM-MSCs,BM-MSCs-CM),酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測GC-MSCs-CM和BM-MSCs-CM中HGF水平。
利用HGF中和抗體中和上清中的HGF后作用于胃癌細胞株(SGC-7901和/或MGC-803),采用CCK8實驗檢測胃癌細胞增殖活性,克隆形成實驗檢測胃癌細胞克隆形成能力,Transwell和細胞劃痕實驗檢測胃癌細胞遷移能力,Western-blotting檢測胃癌細胞增殖和遷移相關(guān)蛋白表達水平,Western-blotting和流式細胞術(shù)檢測胃癌細胞PD-L1表達水平。
為了在體內(nèi)驗證HGF對胃癌的影響,構(gòu)建BALB/c裸鼠皮下成瘤模型,觀察體內(nèi)腫瘤形成情況,并通過Western-blotting檢測腫瘤組織中PD-L1表達水平。用外源性HGF處理胃癌細胞,利用CCK8、流式細胞術(shù)及Western-blotting進一步證實HGF對胃癌細胞增殖及PD-L1表達的作用。
ELISA檢測健康人及胃癌患者血清中HGF水平,Kmplot數(shù)據(jù)庫分析HGF m RNA表達與胃癌患者總體生存率的關(guān)系,免疫組織化學(xué)染色(IHC)觀察胃癌患者組織中HGF表達水平。結(jié)果:GC-MSCs-CM中的HGF含量明顯高于BM-MSCs-CM(P<0.05)。
參考文獻
[1]The roles of PD‐1/PD‐L1 and its signalling pathway in gastrointestinal tract cancers[J].Chunguo Cui,Bo Yu,Qi Jiang,Xingfang Li,Kaiyao Shi,Zecheng Yang.Clinical and Experimental Pharmacology and Physio.2019(1)
[2]Dipalmitoylphosphatidic acid inhibits breast cancer growth by suppressing angiogenesis via inhibition of the CUX1/FGF1/HGF signalling pathway[J].Jian Chen,Zijun Zhou,Yuying Yao,Jianwei Dai,Dalei Zhou,Lijing Wang,Qian‐Qian Zhang.Journal of Cellular and Molecular Medicine.2018(10)
[3]HGF derived from cancer?associated fibroblasts promotes vascularizationin gastric cancer via PI3K/AKT and ERK1/2 signaling[J].Xusheng Ding,Wenqi Xi,Jun Ji,Qu Cai,Jinling Jiang,Min Shi,Yingyan Yu,Zhenggang Zhu,Jun Zhang.Oncology Reports.2018(2)
[4]Enhanced motility and proliferation by miR?10b/FUT8/p?AKT axis in breastcancer cells[J].Dong Guo,Jia Guo,Xiang Li,Feng Guan.Oncology Letters.2018(2)
[5]叢春暉.GC-MSCs旁分泌HGF對胃癌生長作用及機制研究[D].江蘇大學(xué),2019.