背景^[1-7]

Cdc34 Rabbit Monoclonal Antibody(CDC34兔單克隆抗體)是CDC34作為抗原對兔進行免疫后篩選出只產生的CDC34抗體的B淋巴細胞，再將B細胞通過細胞融合技術與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌CDC34抗體的雜交瘤細胞，最后通過層析柱純化制的高純度的CDC34抗體兔單克隆抗體。由Cdc34基因編碼的蛋白質是遍在蛋白綴合酶家族的成員。遍在蛋白綴合酶催化遍在蛋白與其他蛋白質的共價連接。該蛋白質是大型多蛋白復合物的一部分，其是遍在蛋白介導的細胞周期G1調節(jié)劑降解和DNA復制起始所必需的。

泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）控制幾乎所有細胞過程中數(shù)千種蛋白質的穩(wěn)定性，相互作用和定位。泛素與底物賴氨酸殘基的綴合由保守的酶促級聯(lián)催化：E1酶以ATP依賴性方式激活泛素作為硫酯，并將活化的遍在蛋白轉移至E2的催化半胱氨酸殘基，然后E2與E3酶相互作用。將遍在蛋白作為異肽結合到基質上。E3酶，也稱為泛素連接酶，通過特定的蛋白質相互作用域賦予底物特異性，并分為兩大類：HECT結構域類形成催化泛素硫酯中間體，而RING結構域類將帶電荷的E2并置在底物旁邊。

在人類基因組編碼兩個E1酶，至少38種E2酶，以及超過600種不同E3酶，其中的每一個具有潛力來識別多個基板。的E3酶家族，cullin-RING連接酶（CRLs），最初被發(fā)現(xiàn)為多亞基Skp1-Cdc53/Cullin-F盒蛋白（SCF）泛素連接酶。SCF復合物包含核心亞基Skp1，Cdc53/Cul1和Rbx1/Roc1/Hrt1以及一組稱為F box蛋白的銜接子亞基，其通常以磷酸化依賴性方式募集特定底物至核心復合物。

至于所有人RING結構域E3酶，SCF復合物捕獲底物用于E2介導的遍在蛋白化，但本身不具有催化活性?；陬愃频你暯幼?cullin-RING結構構建的SCF樣復合物包括促進復合物/環(huán)狀體的后期和基于Cul2-，Cul3-，Cul4A-，Cul5-和Cul6-的泛素連接酶。因此，CRL類具有靶向數(shù)百種（如果不是數(shù)千種）蛋白質降解的能力。CDC34（細胞分裂周期34）是蛋白質編碼基因。

其相關途徑包括TCR信號傳導（REACTOME）和CLEC7A（Dectin-1）信號傳導。與該基因相關的基因本體論（GO）注釋包括連接酶活性和遍在蛋白連接酶結合。CDC34在控制細胞周期和DNA復制中很重要。與不同的E3復合物（包括SCF）相關的Cdc34已經顯示出在細胞分裂，信號轉導和發(fā)育過程中靶向許多不同的底物以進行泛素化和降解。

已經表征的Cdc34底物包括IκB，B-Myb，Wee1，MyoD，ICERIIα，ATF5，p27Xic1和p27Kip1。另外，由于它們對蛋白水解的SCF要求，諸如β-連環(huán)蛋白，p21Cip1，E2F，細胞周期蛋白E和細胞周期蛋白D的底物是Cdc34的推定底物。已經證明Cdc34通過C末端的結構域自締合，并且在體內被磷酸化和泛素化。該蛋白質可用于體外泛素化反應。

應用^[8][9]

CDC34兔單克隆抗體可用于CDC34活性半胱氨酸對自身穩(wěn)定性的調控及CDC34相互作用蛋白的鑒定與功能研究：

細胞內許多蛋白質的降解都依賴于泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS),在該系統(tǒng)中有3種非常重要的酶,泛素激活酶E1、泛素結合酶E2、泛素連接酶E3。泛素蛋白酶體系統(tǒng)的失調與許多人類疾病,如癌癥、免疫性疾病、神經退行性疾病以及病毒感染等關系甚密。CDC34(cell division cycle 34)蛋白,是E2泛素結合酶家族中的一員,它能聯(lián)合E3泛素連接酶復合體(SCF,Skp1-Cullin 1-F-box protein)泛素修飾靶蛋白。CDC34可以產生有K48連接的多聚泛素鏈,從而利用蛋白酶體降解這些泛素化靶蛋白。

近年來發(fā)現(xiàn)CDC34能通過對p27Kip1蛋白水平的調節(jié)來調控細胞的增殖,CDC34對p27Kip1蛋白水平的不正常調節(jié)已被證實與人二倍體成纖維細胞的增殖有關。有研究表明,CDC34能在HCC(hepatocellular carcinomas)細胞(肝癌細胞)的細胞質及細胞核中過表達,發(fā)現(xiàn)它對肝細胞癌的增殖和分化有著促進作用。CDC34的活性位點93位的半胱氨酸進行了點突變,探索了突變體對其自身泛素化和穩(wěn)定性的影響,使用野生型和突變體來純化并用LC-MS/MS尋找CDC34相互作用蛋白,然后對這些蛋白進行了驗證和相互調控關系的研究。

研究方法:構建帶有Strep-FLAG標簽的野生型CDC34以及突變型的CDC34 C93S質粒,在HEK293T細胞中表達CDC34野生型和突變體,蛋白免疫印跡在全蛋白中檢測野生型和突變體的表達情況,檢測活性位點突變對CDC34自身穩(wěn)定性和泛素化的影響。

參考文獻

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