背景^[1-3]

ANTI-CD86抗體是一類可以特異性結(jié)合ANTI-CD86的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)ANTI-CD86的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。

檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中ANTI-CD86水平。用純化的ANTI-CD86抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-CD86，再與HRP標(biāo)記的ANTI-CD86抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-CD86呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中ANTI-CD86濃度。

CD86，別名為B7.2，分子量為80Kd，表達(dá)于樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、記憶T淋巴細(xì)胞、生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞、活化B淋巴細(xì)胞及活化T淋巴細(xì)胞。他屬于免疫球蛋白超家族，其配體是CD28和CD152（CTLA4）。

活化的T淋巴細(xì)胞在機(jī)體的抗腫瘤、抗感染和自身免疫疾病中發(fā)揮重要作用。T細(xì)胞的活化不僅需要T細(xì)胞受體（TCR）與抗原肽-MHC復(fù)合物作用產(chǎn)生的信號(hào)，還需要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞（APC）表面的B7家族協(xié)同刺激分子與T細(xì)胞上的相應(yīng)受體結(jié)合產(chǎn)生的第二信號(hào)。

協(xié)同刺激分子與其受體結(jié)合產(chǎn)生正性或負(fù)性信號(hào)。協(xié)同刺激分子CD80和CD86與其受體CD28結(jié)合產(chǎn)生正性信號(hào)，或與其受體CTLA-4結(jié)合提供負(fù)性信號(hào)，調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性，進(jìn)而調(diào)控機(jī)體的免疫反應(yīng)。協(xié)同刺激分子CD80和CD86表達(dá)在APC細(xì)胞上，而在多數(shù)的腫瘤組織及細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)，從而不能有效的誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化，引起腫瘤細(xì)胞免疫逃逸而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

應(yīng)用^[4][5]

用于益生菌提取物L(fēng)FK對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型脾臟組織中CD80和CD86表達(dá)的影響研究

對(duì)變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型經(jīng)口途徑分別給予酶裂解的腸球菌FK-23株(lysed Enterococcus faecalis FK-23,LFK),觀測(cè)小鼠脾臟內(nèi)抗原提呈細(xì)胞(antigen-presenting cells,APC)表面組織中共刺激分子CD80和CD86的表達(dá)改變,評(píng)價(jià)益生菌對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR的免疫調(diào)節(jié)作用。

方法：共計(jì)75只BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組：①陽性對(duì)照組；②LFK干預(yù)組；③陰性對(duì)照組。采用OVA腹腔注射及鼻部激發(fā)建立小鼠AR模型,陰性對(duì)照組小鼠采用生理鹽水代替OVA進(jìn)行腹腔注射及滴鼻。

用LFK菌液分別對(duì)AR小鼠模型進(jìn)行灌胃,共計(jì)3周；陽性和陰性對(duì)照組以生理鹽水代替菌液灌胃處理。觀測(cè)第21天小鼠搔鼻和噴嚏次數(shù)。第22天殺鼠取材,小鼠脾臟組織用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)APC表面共刺激分子CD80和CD86的表達(dá)。并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子IL-12水平。

結(jié)果：第21天小鼠搔鼻和噴嚏次數(shù),陽性對(duì)照組及LFK干預(yù)組明顯高于陰性對(duì)照組(P<0.05),LFK干預(yù)組明顯低于陽性對(duì)照組(P<0.05)。血清IL-12水平陽性對(duì)照組較陰性對(duì)照組顯著降低(P<0.001),LFK干預(yù)組較陽性對(duì)照組顯著升高(P<0.001),但與陰性對(duì)照組相比仍明顯降低(P<0.001)。

小鼠脾臟APC表面共刺激分子組織中CD80的表達(dá),陽性對(duì)照組明顯低于陰性對(duì)照組及LFK干預(yù)組(P<0.05),LFK干預(yù)組與陰性對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；CD86的表達(dá),陽性對(duì)照組明顯高于陰性對(duì)照組及LFK灌胃干預(yù)組(P<0.05),LFK干預(yù)組與陰性對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

參考文獻(xiàn)

[1]Mouse bone marrow‐derived dendritic cells can phagocytize the S porothrix schenckii,and mature and activate the immune response by secreting interleukin‐12 and presenting antigens to T lymphocytes[J].Masahiro Kusuhara,Hua Qian,Xiaoguang Li,Daisuke Tsuruta,Atsunari Tsuchisaka,Norito Ishii,Chika Ohata,Minao Furumura,Takashi Hashimoto.J Dermatol.2014(5)

[2]Evaluation of the Effect of Lactobacillus paracasei(HF.A00232)in Children(6–13 years old)with Perennial Allergic Rhinitis:A 12-week,Double-blind,Randomized,Placebo-controlled Study[J].Wen-Ya Lin,Lin-Shien Fu,Heng-Kuei Lin,Chian-Yin Shen,Yee-Jun Chen.Pediatrics&Neonatology.2013

[3]Protective Effects of Exogenous Surfactant Protein A in Allergic Rhinitis:A Mouse Model[J].Ren,Jie,Deng,Yuqin,Xiao,Bokui,Wang,Guirong,Tao,Zezhang.The Annals of Otology,Rhinology&Laryngology.2013(4)

[4]The relationship between Th1/Th2 balance and 1α,25-dihydroxyvitamin D 3 in patients with nasal polyposis[J].Sule Ozkara,Erol Keles,Nevin Ilhan,Hilal Gungor,Irfan Kaygusuz,Hayrettin Cengiz Alpay.European Archives of Oto-Rhino-Laryngology.2012(12)

[5]張清照.益生菌提取物L(fēng)FK對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型脾臟組織中CD80和CD86表達(dá)的影響[D].南京醫(yī)科大學(xué),2014.