方法和結(jié)果:以 L-苯丙氨酸為例,研究了適用于甲基營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用的穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸的制備微生物合成( 2 H)。該氨基酸由革蘭氏陰性需氧兼性甲基營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌 Brevibacterium methylicum 分泌,通過核酮糖-5-單磷酸 (RMP) 碳同化循環(huán)同化甲醇,甲基營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌 В. methylicum 分泌的 L-苯丙氨酸適應(yīng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基中氘的最大濃度的數(shù)據(jù),含量為 98% 2 Н 2 O 和 2% [ 2 Н]甲醇, 并提出了具有不同富集水平的氘標(biāo)記的L-苯丙氨酸的生物合成。該菌株通過在堅(jiān)硬的(2%瓊脂糖)最小生長(zhǎng)培養(yǎng)基上接種初始細(xì)胞來適應(yīng),從0開始,梯度為2Н2O濃度;24.5;49.0;73.5高達(dá)98%2Н2O,隨后選擇對(duì)2Н2O作用穩(wěn)定的獨(dú)立菌落。這些菌落能夠產(chǎn)生L-苯丙氨酸。L-苯丙氨酸通過用異丙醇提取從生長(zhǎng)培養(yǎng)基中提取,隨后在乙醇中結(jié)晶(產(chǎn)量0.65 g/l)。結(jié)論:所開發(fā)的微生物合成方法允許獲得具有不同同位素富集水平的氘標(biāo)記的 L-苯丙氨酸,具體取決于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中 2 Н 2 O 的濃度,從 17%(在生長(zhǎng)培養(yǎng)基上為 24,5% 2 Н 2 O)到 75%(在生長(zhǎng)培養(yǎng)基上為 98% 2 Н 2 O)的氘在分子中,這得到了甲基醚的電子沖擊 (EI) 質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)的證實(shí)在這些實(shí)驗(yàn)條件下的N-二甲氨基(萘)-5-磺酰氯(丹磺?;┍奖彼帷?/span>
方法和結(jié)果:以甘油為碳源,以重組大腸桿菌菌株為研究對(duì)象,采用 15 L 尺度研究芳香族氨基酸 L-苯丙氨酸的補(bǔ)料分批生產(chǎn)。將通量變異性分析(FVA)應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)通量估計(jì),以深入了解L-苯丙氨酸生產(chǎn)過程中的細(xì)胞內(nèi)通量分布。變異性分析揭示了中心碳代謝中較大的通量不確定性,特別是在蘋果酸消費(fèi)方面。由于這些結(jié)果,兩種重組菌株被基因工程改造,它們?cè)谔O果酸降解和厭娠反應(yīng)的能力上有所不同(大腸桿菌 FUS4.11 ΔmaeA pF81kan 和大腸桿菌 FUS4.11 ΔmaeA ΔmaeB pF81kan)。在標(biāo)準(zhǔn)化的 L-苯丙氨酸生產(chǎn)工藝中應(yīng)用這些蘋果酸酶敲除突變體可產(chǎn)生幾乎相同的工藝性能(例如,L-苯丙氨酸濃度、生產(chǎn)率和副產(chǎn)物形成)。這清楚地突出了大腸桿菌中樞代謝的巨大冗余。結(jié)論:在補(bǔ)料分批生產(chǎn) L-苯丙氨酸期間,通過基于約束的分析估計(jì)細(xì)胞內(nèi)通量的不確定性通過應(yīng)用蘋果酸酶敲除突變體大大降低。
眾所周知,基于陽(yáng)離子氨基酸的表面活性劑會(huì)與細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙層相互作用,從而通過破壞膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)導(dǎo)致去極化、裂解和細(xì)胞死亡。方法和結(jié)果:合成了一系列源自 L-苯丙氨酸 (C1-C20) 和 L-酪氨酸 (C8-C14) 酯的陽(yáng)離子表面活性劑類似物,并篩選了它們的抗菌活性。
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王玲