背景^[1-7]

FITC標記山羊抗兔IgG(H+L)用純化的兔IgG免疫山羊，然后用親和純化柱對獲得的抗血清進行純化，并經(jīng)過人IgG吸附純化的優(yōu)質(zhì)二抗。對人IgG幾乎沒有結合能力。該FITC標記山羊抗兔IgG(H+L)片段化兔抗山羊二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下兩個靠二硫鍵連接的結合抗原的Fab部分，依然是二價的；FITC標記山羊抗兔IgG(H+L)片段形式的二抗可避免與Protein A/G或與Fc受體的結合，還由于其分子本身比較好，更容易滲透入細胞組織結構內(nèi)而靈敏度更高。

就種屬特異性，該二抗與山羊IgG分子有特異性反應，與其它山羊免疫球蛋白（包括IgM、IgE、IgD、IgA等）的輕鏈有交叉反應。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無交叉反應。通過血清吸附處理，其與小鼠、人、兔血清內(nèi)蛋白（包括免疫球蛋白）的交叉反應降到最低，但可能與除此以外其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應。

FITC是一種常用的綠色熒光探針。FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）純品為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389。4，吸收光波長為490～495nm，發(fā)射光波長為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應用最廣泛的熒光素。

由于FITC是小分子化合物，每一個抗體可標記幾個FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。然而FITC的缺點是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。FITC性質(zhì)穩(wěn)定，能與蛋白質(zhì)結合，是檢測組織細胞內(nèi)蛋白質(zhì)最常用的熒光探針。它還能標記抗體，可用于免疫組織化學單染或多重染色。FITC熒光二抗主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。缺點是在光照下易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。

應用^[8][9]

FITC標記山羊抗兔IgG(H+L)可用于模型兔的免疫組化實驗：

動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種多因素引起的疾病,涉及遺傳、環(huán)境、代謝等諸多因素。許多研究表明炎癥在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展和演變過程中起著重要作用。因此,對動脈粥樣硬化發(fā)病機制的研究及其病變過程的了解,有助于發(fā)現(xiàn)新的預防和治療手段,以阻斷和減緩動脈粥樣硬化的發(fā)展。

目的:（1）探討在兔高脂血癥動脈粥樣硬化模型中血流動力學指標的變化,動脈粥樣硬化斑塊處剪切應力的分布;探討血流動力學因素在動脈粥樣硬化形成過程中的變化規(guī)律;（2）從蛋白和基因水平探討兔高脂血癥動脈粥樣硬化模型中斑塊處趨化因子包括白細胞介素-8（interleukin-8,IL-8）、單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein,MCP-1）和Fractalkine表達的變化規(guī)律;（3）探討在體表達的趨化因子含量與血流動力學因素之間是否存在一定的關系,與血脂指標和動脈粥樣硬化進程之間是否存在一定的相關性。

方法:（1）用高脂和免疫損傷相結合的方法制備兔高脂血癥動脈粥樣硬化模型,根據(jù)造模時間分組:4周對照組、4周動脈粥樣硬化模型組、8周對照組、8周動脈粥樣硬化模型組、12周對照組、12周動脈粥樣硬化模型組。（2）用游標卡尺測定頸總動脈血管外徑,用電磁流量儀測定頸總動脈血流量,并從對側頸總動脈插管用生理記錄儀測定血壓,用流變測定儀測定不同切變率(0.512 S-1、5.96 S-1、51.2 S-1、128.5 S-1)下血液粘度。（3）用計算流體力學（CFD）的方法,數(shù)值模擬了動脈粥樣硬化模型中頸動脈分叉流場分布。（4）應用免疫組化的方法,檢測了動脈粥樣硬化模型組主動脈升弓部動脈粥樣硬化斑塊處IL-8、MCP-1、Fractalkine和其受體CX3CR1的蛋白表達。

參考文獻

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