背景^[1-3]

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞是一種人類胚胎肺成纖維細(xì)胞系列的細(xì)胞株。這種細(xì)胞系來自于人類胚胎肺組織，被廣泛用于研究肺部疾病、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。HFL1細(xì)胞是一種成纖維細(xì)胞，主要功能包括產(chǎn)生膠原蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)成分，參與組織修復(fù)和炎癥反應(yīng)等生物學(xué)過程。

人胚胎肺成纖維細(xì)胞（Human Embryonic Lung Fibroblasts，簡(jiǎn)稱HELF）是來源于人類胚胎肺組織的一種細(xì)胞類型。這些細(xì)胞在胚胎發(fā)育的早期階段存在，主要功能包括產(chǎn)生膠原蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)成分，參與組織結(jié)構(gòu)的維持和修復(fù)。

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞是一種成纖維細(xì)胞，類似于HFL1細(xì)胞，它們?cè)谘芯糠尾考膊?、?xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域具有重要作用。研究人員可以使用HELF細(xì)胞來探究肺部疾病的發(fā)病機(jī)制，測(cè)試藥物的療效，研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路，以及研究細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化等生物學(xué)過程。

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞的研究有助于深入了解肺部疾病的發(fā)展機(jī)制，為相關(guān)疾病的治療和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，這些細(xì)胞也在醫(yī)學(xué)研究和藥物開發(fā)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為類；

1.細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

HELF人胚肺成纖維細(xì)胞可以用于砷對(duì)HELF細(xì)胞β-catenin、Axin、C-myc基因mRNA表達(dá)的影響

為了解砷暴露對(duì)肺癌發(fā)病率影響,以及砷暴露對(duì)HELF人胚肺成纖維細(xì)胞β-catenin.Axin、C-myc mRNA表達(dá)的影響,為進(jìn)一步探明砷致肺部病變的機(jī)制提供參考資料。

方法：通過文獻(xiàn)查閱法對(duì)以往有關(guān)砷暴露致肺癌的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行meta分析,以發(fā)現(xiàn)砷暴露對(duì)肺癌發(fā)病率的影響,從大體上得出砷暴露對(duì)肺癌的影響。通過實(shí)驗(yàn)的方法探討砷暴露對(duì)HELF人胚肺成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生長(zhǎng)、氧化應(yīng)激的改變；使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的改變；使用反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)WNT信號(hào)通路核心分子的基因表達(dá)的改變。

結(jié)果：(1)Meta分析發(fā)現(xiàn)砷暴露增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.19,95%CI=1.60.3.01):(2)砷暴露可以導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,使HELF人胚肺成纖維細(xì)胞變形,細(xì)胞核變大；(3)砷暴露的劑量及時(shí)間的增加可導(dǎo)致細(xì)胞的抑制率增加；(4)與對(duì)照組相比,各濃度各時(shí)間亞砷酸鈉染毒HELF細(xì)胞G2+M期的比例均升高；HELF細(xì)胞G2+M期的比例在染毒24、48h時(shí)均與亞砷酸鈉染毒濃度呈正相關(guān)(24h：r=0.959,P<0.05；48h：r=0.768,P<0.05)。(5)HELF人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡比例在染毒24、48、72h時(shí)均與亞砷酸鈉染毒濃度均呈正相關(guān)(24h:r=0.927,P<0.05；48h:r=0.921,P<0.05,72h：r=0.989,P<0.05)。(6)染毒24、48、72h時(shí),與對(duì)照組相比,砷暴露組培養(yǎng)液內(nèi)的超氧化物岐化酶的活力均下降(P<0.05)；各濃度亞砷酸鈉染毒細(xì)GSH-PX濃度下降(P<0.05)。HELF人胚肺成纖維細(xì)胞GSH-PX濃度在染毒24、48、72h時(shí)均與亞砷酸鈉染毒濃度均呈負(fù)相關(guān)(24h:r=-0.989,P<0.05；48h：r=-0.990,P<0.05,72h：r=-0.970,P<0.05)。(7)與對(duì)照組相比,各濃度亞砷酸鈉染毒24、48、72h后HELF人胚肺成纖維細(xì)胞內(nèi)β-catenin mRNA表達(dá)均降低(P<0.05);細(xì)胞內(nèi)Axin mRNA表達(dá)均增高(P<0.05)；細(xì)胞內(nèi)C-myc mRNA表達(dá)均下降(P<0.05)。

參考文獻(xiàn)

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