介紹

2',7'-二氯熒光素二乙酸酯的分子式為C21H17Cl2O6，外觀為，可溶于水和一些有機(jī)溶劑，如DMSO。它是一種常用的熒光探針，廣泛應(yīng)用于檢測活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）特別是過氧化氫（H?O?）的生成。

圖一 2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

合成

將5-氨基-BAPTA 四甲酯（1.0g，1.82mmoles）溶解在15mL CH2Cl2中以得到澄清溶液。在10分鐘內(nèi)將羧基-2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯的混合酸酐溶液（1.15 g溶于5 mL CH2 Cl2中）滴加到攪拌中的胺溶液中。反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。第二天的TLC（在EtOAc中）顯示轉(zhuǎn)化為新產(chǎn)品，在暴露于氨蒸氣時(shí)產(chǎn)生有色熒光產(chǎn)品（Rf=0.25，酸酐Rf=0.9）。產(chǎn)物在填充有200 mL 35-70μ硅膠的柱上分離，用1:1:1 CHCl3:己烷：EtOAc洗脫。在30°C下蒸發(fā)純餾分，得到1.35 g（1.27毫摩爾；70.1%收率）純2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯BAPTA四甲酯。CDCl3中的NMR顯示：2.4ppm，s 6H；3.6ppm，s 12H；4.15ppm，s 8H；4.2-4.35ppm，d 4H；6.8 ppm，m7H；7.3-7.4 ppm，m 4H；8.3 ppm，d 1 H；8.6 ppm，d 2H[1]。

圖二 2',7'-二氯熒光素二乙酸酯的合成

將4-二甲氨基吡啶（15μmol，0.1當(dāng)量）和吡啶（0.33 mmol，2.2當(dāng)量）加入2′，7′-二氯熒光素（0.15 mmol，1當(dāng)量）和二氯甲烷（2.0 mL）中；滴加酰氯（0.33 mmol，2.2 eq），攪拌所得溶液1小時(shí)；用水稀釋，用二氯甲烷萃取，用飽和氯化銨水溶液和飽和鹽水洗滌有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥有機(jī)相，抽濾，減壓除去溶劑；用少量二氯甲烷完全溶解殘余物，加入約等于殘余物體積的中性二氧化硅粉末，充分?jǐn)嚢韬?，真空除去溶劑，得到粗產(chǎn)物-硅膠粉末，然后將其干燥裝入柱中；通過硅膠柱色譜法（環(huán)己烷：乙酸乙酯=10:4，體積比）純化產(chǎn)物2',7'-二氯熒光素二乙酸酯[2]。

圖三 2',7'-二氯熒光素二乙酸酯的合成2

參考文獻(xiàn)

[1]Kuhn A M ,Haugland P R .Reactive derivatives of bapta used to make ion-selective chelators[P].US19920843360,1995-09-26.

[2]林偉英,唐永和,遲涵文.一種檢測活性胺的熒光探針及其應(yīng)用[P].廣西壯族自治區(qū):CN202210605309.8,2022-09-02.