背景及概述^[1]

2',7'-二氯熒光素二乙酸酯是一種熒光探針，作為一種非極性化合物，能夠迅速擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)的酯酶將其水解為非熒光的二氯熒光素（DCFH），從而使探針被裝載到細(xì)胞內(nèi)。

應(yīng)用舉例^[1]

CN201610307068.3報(bào)道了卷煙煙氣的體外毒理學(xué)研究，具體是一種卷煙煙氣有害成分誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激ROS的測(cè)定方法。卷煙煙氣是一種復(fù)雜的氣溶膠，煙氣中的化學(xué)成分多達(dá)8000余種，同時(shí)包含有 1014-1016個(gè)自由基，具有氧化性。卷煙煙氣中氧化性物質(zhì)會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的增加，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的ROS會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)（DNA）等造成損傷。測(cè)定方法特征在于：是利用熒光探針2',7'-二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)檢測(cè)細(xì)胞氧化損傷后胞內(nèi)活性氧ROS水平，包括以下具體步驟：1)配置實(shí)驗(yàn)試劑；2)細(xì)胞接種培養(yǎng)；3)、DCFH-DA探針裝載；4)、卷煙煙氣有害成分染毒；5)、ROS檢測(cè)。機(jī)理是DCFH-DA作為一種非極性化合物，能夠迅速擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞 內(nèi)的酯酶將其水解為非熒光的二氯熒光素（DCFH），從而使探針被裝載到細(xì)胞內(nèi)，在ROS存在的條件下，DCFH被氧化生成熒光物質(zhì)DCF，發(fā)出綠色熒光，熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平成正比。本發(fā)明的特點(diǎn)是可快速、靈敏地檢測(cè)卷煙煙氣有害成分誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷程度，對(duì)研究卷煙煙氣有害成分對(duì)于誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS的影響有非常重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1] [中國發(fā)明] CN201610307068.3 卷煙煙氣有害成分誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激ROS的測(cè)定方法