染色是使細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu),如細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等染上不同的顏色,以便于鏡下觀察識(shí)別。瑞氏染色液的原理是利用堿性染料亞甲藍(lán)和酸性染料伊紅對(duì)細(xì)胞的化學(xué)親和力和物理吸附作用進(jìn)行染色。細(xì)胞內(nèi)不同的化學(xué)成分與染料結(jié)合后,會(huì)呈現(xiàn)出不同的顏色,從而使得細(xì)胞的各種結(jié)構(gòu)易于觀察和區(qū)分。試劑配制是瑞氏染色的重要環(huán)節(jié)。瑞氏染料是由伊紅和亞甲藍(lán)組成的,將適量伊紅和亞甲藍(lán)溶解在甲醇中即成瑞氏染液。甲醇的作用是溶解染料和固定細(xì)胞形態(tài)。
注意事項(xiàng)
1、pH值對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞的各種成分均由蛋白質(zhì)構(gòu)成,蛋白質(zhì)均為兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液pH而定。因此,染色時(shí)需要注意控制溶液的pH值,以保證染色的準(zhǔn)確性。一般來說,使用緩沖液來調(diào)整pH值,使其保持在6.8左右。
2、未干透的血膜不能進(jìn)行染色,否則染色時(shí)血膜容易脫落。同時(shí),染色時(shí)間的長短與染液濃度、染色時(shí)溫度及血細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。需要根據(jù)染液濃度、染色時(shí)溫度和血細(xì)胞數(shù)量來調(diào)整染色時(shí)間。
3、沖洗時(shí)不能先倒掉染液,應(yīng)該用流水沖洗,以防染料沉淀在血膜上。同時(shí),如果血膜上有染料顆粒沉積,可以用甲醇溶解,但需要立即用水沖掉甲醇,以免脫色。
4、如果染色過淡,可以復(fù)染。復(fù)染時(shí)需要先加緩沖液,創(chuàng)造良好的染色環(huán)境,然后加入瑞氏染色液或染液與緩沖液的混合液。
5、如果染色過深,可以用水沖洗或浸泡水中一定時(shí)間來降低染色深度。也可以用甲醇脫色,但需要立即用水沖掉甲醇。
6、當(dāng)發(fā)現(xiàn)染色偏酸或偏堿時(shí),應(yīng)該更換緩沖液再重染。同時(shí)需要注意緩沖液的質(zhì)量和濃度是否符合要求。
7、瑞氏染色液的質(zhì)量好壞可以通過吸光度比值(RA)來評(píng)價(jià)。一般來說,瑞氏染液的成熟指數(shù)以RA=1.3±0.1為宜。如果RA值不符合要求,需要更換新的瑞氏染液或者調(diào)整染液的濃度。