背景及概述[1-2]
造血基質(zhì)細(xì)胞主要存在于骨髓,臍血中是否存在造血基質(zhì)細(xì)胞,能否在體外擴(kuò)增,有關(guān)這些問題目前相關(guān)研究報道少。有研究成功分離培養(yǎng)了人臍血源黏附細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)分離培養(yǎng)困難。采用3%明膠聯(lián)合Ficoll分離MNC,結(jié)果細(xì)胞的貼壁率及原代培養(yǎng)的成功率都非常低。為此,在前期研究的基礎(chǔ)上,需要探索不同明膠濃度及淋巴細(xì)胞分離液對人臍血源黏附細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響,希望能探尋一種合適的分離培養(yǎng)條件,為人臍血源黏附細(xì)胞在臨床早日應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
分類[1]
Percoll和Ficol1是目前常用的細(xì)胞分離液,其分離血細(xì)胞的原理是利用各種細(xì)胞密度的差異,將其分離于自上而下的不同液體層次中。Percoll由表面黏附有聚乙烯吡咯酮的膠體硅組成,而Ficol1主要由葡聚糖和泛影酸鈉組成。如果需分離的標(biāo)本量較少,使用細(xì)胞分離液能形成較好的MNC層,也方便收集;但如果需要分離的標(biāo)本量較多,不但分離液使用量大,且離心后部分紅細(xì)胞仍然可能懸浮在分離液中,致使收集的MNC可能混雜紅細(xì)胞。此外,界面過大也不利于MNC的收集。明膠溶液可以破壞紅細(xì)胞表面電荷,加速紅細(xì)胞沉降,使之與其它細(xì)胞分離。3%明膠沉降紅細(xì)胞的效果雖然,但分離后除MNC外,還含有其它有核細(xì)胞,對于僅需要MNC為對象的研究,用該液分離并不能達(dá)到預(yù)期效果。另外,明膠溶液能否去除臍血中的幼稚紅細(xì)胞,尚待實驗研究證實。因此,目前大多實驗和臨床應(yīng)用中采用明膠聯(lián)合分離液進(jìn)行血細(xì)胞MNC的分離。
應(yīng)用[2-3]
應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液純化大鼠胰島。有研究建立一種簡便、易行和高效的胰島分離純化方法,以減少對胰島細(xì)胞的損傷,獲得高質(zhì)量的胰島組織。選用SD大鼠經(jīng)膽總管原位灌注膠原酶液,分離消化胰腺組織,用淋巴細(xì)胞分離液純化胰島細(xì)胞。結(jié)果:可收獲大量的高純度胰島,純度達(dá)95%以上,體外葡萄糖刺激實驗表明胰島對刺激反應(yīng)良好,將胰島移植于糖尿病小鼠體內(nèi)可短期糾正其高血糖狀態(tài)。結(jié)論:應(yīng)用單一密度淋巴細(xì)胞分離液純化大鼠胰島的方法是一種操作簡單、價格低廉、重復(fù)性好的大鼠胰島純化方法。
淋巴細(xì)胞分離液對T細(xì)胞陽性花環(huán)和非T細(xì)胞陽性花環(huán)計數(shù)結(jié)果影響的研究。有研究探討單克隆抗體SPA紅細(xì)胞花環(huán)法(McAb-A-E法)檢驗T淋巴細(xì)胞亞群時,淋巴細(xì)胞分離液對陽性花環(huán)細(xì)胞計數(shù)結(jié)果以及非T淋巴細(xì)胞陽性花環(huán)計數(shù)結(jié)果的影響。方法選擇淋巴細(xì)胞分離液法分離的單個核細(xì)胞(PBMC)和不加任何物質(zhì)的抗凝血用自然沉降法分離的混合細(xì)胞,用10倍量稀釋液洗滌1次。兩種細(xì)胞用McAb-A-E直接法進(jìn)行樣本對照,并作統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果對20例臨床標(biāo)本用兩種不同方法制取單個核細(xì)胞懸液的實驗對照研究,2組CD3+(t=-4.197,P=0.000)、CD4+(t=-5.177,P=0.000)、CD8+(t=-4.240,P=0.000)、CD4+/CD8+(t=-1.958,P=0.095)進(jìn)行比較,CD3+、CD4+、CD8+3組結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義,均為P<0.001。CD4+/CD8+結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);2組非T淋巴細(xì)胞陽性花環(huán)比較(t=-5.638,P=0.000),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。結(jié)論淋巴細(xì)胞分離液分離的PBMC細(xì)胞,用10倍量的稀釋液洗滌1次,細(xì)胞表面黏附的黏稠淋巴細(xì)胞分離液是無法全部除去的,其對實用McAb-A-E直接法實驗的影響是使陽性花環(huán)淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)果偏高,相對的陰性淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)果偏低。
主要參考資料
[1] 不同明膠濃度及淋巴細(xì)胞分離液對人臍血源黏附細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響
[2] 應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液純化大鼠胰島的實驗研究
[2] 淋巴細(xì)胞分離液對T細(xì)胞陽性花環(huán)和非T細(xì)胞陽性花環(huán)計數(shù)結(jié)果影響的研究