背景及概述^[1]

核酸酶是一類催化核苷酸和核酸中的磷酸二酯鍵水解的酶，分內(nèi)切核酸酶(endonucleases)和外切核酸酶(ex-onucleases)，對紫外線引起的DNA大型光損傷和各種化學(xué)物與DNA形成的加合物的切除修復(fù)中起作用。在N-糖基化酶切除異常的堿基形成AP位點(diǎn)(見切除修復(fù))后，如插入酶將正確的堿基插入AP位點(diǎn)仍不能達(dá)到完全修復(fù)時(shí)，即由AP內(nèi)切核酸酶在AP位點(diǎn)或其旁邊的5′端將DNA切開一個(gè)缺口，使一端成為5′-磷酸基，另一端成為3′-OH基。隨之外切核酸酶再切除一些堿基。除AP內(nèi)切核酸酶外，還有一些對某些DNA損傷有特異性的內(nèi)切核酸酶。其中較特殊的是切除由紫外線產(chǎn)生的嘧啶二聚體的UV內(nèi)切核酸酶。它有時(shí)還能作用于許多較大的螺旋扭曲變形損傷。由于UV內(nèi)切核酸酶還具有外切作用，有時(shí)稱之為“切除核酸酶”(ex-cinuclease)。參見切除修復(fù)、聚合和連接酶。

熱敏型雙鏈DNA特異性核酸酶是雙鏈DNA特異性核酸酶。其特異性的識別降解雙鏈DNA，對單鏈DNA或RNA幾乎無活性，其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。除此外，該雙鏈DNA特異性核酸酶降解雙鏈DNA的能力比bovineDNaseI高~30倍，因此特別適用于去除RNA樣品中的基因組DNA污染。熱敏型雙鏈DNA特異性核酸酶可將DNA降解為2～8bp的產(chǎn)物，且55℃5分鐘可使該酶不可逆失活，同時(shí)又能保持RNA和ssDNA的穩(wěn)定性，因此產(chǎn)物無需再純化，可直接用于后續(xù)反應(yīng)。同時(shí)該酶與M-MLV和AMV的反應(yīng)Buffer都是兼容的，可應(yīng)用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中去除樣本中基因組DNA的污染，提高反轉(zhuǎn)錄效率。

使用注意事項(xiàng)^[1]

1．1×dsDNaseBuffer：20mMTris-HClpH8,2mMMgCl²。該酶需要1～3mMMgCl₂。

2．該酶對DTT敏感，任何反應(yīng)體系中不得包含DTT。

3．通常在RT反應(yīng)中的用量為0.1～0.5U/20μl體系。

4．任何濃度的SDS、鹽酸胍、β-mercaptoethanol或高鹽離子（＞300mM）均抑制該酶活性。

5．該酶的反應(yīng)溫度為25～37℃，42℃30分鐘后活性損失70%。

主要參考資料

[1] 衛(wèi)生學(xué)大辭典