膠原蛋白(也稱(chēng)膠原)是動(dòng)物體中含量最豐富的一類(lèi)蛋白質(zhì)家族，其具有很強(qiáng)的生物活性及生物功能，能參與細(xì)胞的遷移、分化和繁殖，使結(jié)締組織具有機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)膠原蛋白還能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，具有止血、生物相容性和生物降解性能。重組人源膠原蛋白是根據(jù)人膠原蛋白的特性和主要功能域，重新優(yōu)化設(shè)計(jì)基因序列的產(chǎn)物。 此外，其可以促進(jìn)皮膚修復(fù)和再生。

性狀

重組人源膠原蛋白形態(tài)—固態(tài)：白色或類(lèi)白色海綿狀固體；液態(tài)：無(wú)色澄明液體。

pH(1%水溶液)：4.0-8.0

功效

重組人源膠原蛋白可以促進(jìn)皮膚修復(fù)和再生。

制備方法

隨著DNA重組技術(shù)迅速發(fā)展，為了能充分利用膠原蛋白的優(yōu)良特性，科研工作者開(kāi)始尋求動(dòng)物本身以外的膠原蛋白來(lái)源。有許多學(xué)者利用基因工程技術(shù)．選用各種宿主細(xì)胞(包括：哺乳動(dòng)物、昆蟲(chóng)、酵母、大腸桿菌、轉(zhuǎn)基因煙草、轉(zhuǎn)基因鼠、轉(zhuǎn)基因蠶細(xì)胞等)，生產(chǎn)重組人膠原蛋白，產(chǎn)品具有安全性好、重現(xiàn)性好、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。但是，同樣存在著許多不足和困難。

本發(fā)明的目的在于提供一種利用巴氏畢赤酵母進(jìn)行表達(dá)的重組人源膠原蛋白，其具有優(yōu)于動(dòng)物體膠原蛋白的獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性能，同時(shí)提供該重組人源膠原蛋白的制備方法。 

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)解決方案為：一種重組人源膠原蛋白，氨基酸序列如SEQ NO.3，其含有599個(gè)氨基酸，分子量為55.0kDa。 

一種重組人源膠原蛋白的制備方法，步驟如下： 

（1）表達(dá)重組人源膠原蛋白基因工程菌的構(gòu)建，得到巴氏畢赤酵母基因工程菌；

（2）對(duì)基因工程菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)重組人源膠原蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)，得到含有重組人源膠原蛋白的發(fā)酵液；

（3）從發(fā)酵液中純化重組人源膠原蛋白。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點(diǎn)：

(1)設(shè)計(jì)的人源膠原蛋白基因Ge1是全新的序列，且長(zhǎng)度上大大少于天然人膠原蛋白基因(數(shù)Kbp)，實(shí)現(xiàn)了在分子水平的操作簡(jiǎn)單化，更易實(shí)現(xiàn)膠原蛋白的基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)；

(2)該人源膠原蛋白基因Ge1同時(shí)包含天然人膠原蛋白基因的特征，其表達(dá)的蛋白將具有天然人膠原蛋白的優(yōu)良特征；

(3)在人源膠原蛋白的分子長(zhǎng)度方面，通過(guò)制備不同重復(fù)數(shù)同向串聯(lián)基因重組質(zhì)粒，可在進(jìn)一步的酵母表達(dá)研究中實(shí)現(xiàn)接近較大的分子量的天然人膠原蛋白的重組人源膠原蛋白的表達(dá)生產(chǎn)；

(4)該種不同重復(fù)數(shù)同向串聯(lián)基因重組質(zhì)粒的制備方法，僅僅通過(guò)簡(jiǎn)單的體外酶切連接反應(yīng)和具有成熟技術(shù)的原核轉(zhuǎn)化和篩選，實(shí)現(xiàn)了任意重復(fù)數(shù)的目的基因(重組人源膠原蛋白基因Ge1)的串聯(lián)連接；

(5)該法比較現(xiàn)有的許多應(yīng)用PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)重復(fù)更具有可行性和更易獲得成功，避免了達(dá)到重復(fù)串聯(lián)目的基因的PCR操作中需要的高難度的引物設(shè)計(jì)和條件探索工作；

(6) 可誘導(dǎo)表達(dá)的畢赤酵母工程菌能實(shí)現(xiàn)重組人源膠原蛋白在胞內(nèi)和胞外的高水平表達(dá)，其培養(yǎng)易于放大，并可利用高密度發(fā)酵方式高產(chǎn)目的蛋白，分泌表達(dá)有利于表達(dá)產(chǎn)物的分離純化，降低生產(chǎn)成本，且其對(duì)所表達(dá)的外源蛋白有一定的翻譯后修飾功能，如糖基化等。

參考文獻(xiàn)

CN102443057A