背景及概述[1]
Escherichiacoli中存在著一類特異識別 8-羥基鳥嘌呤的修復(fù)酶：甲酰胺嘧啶 -DNA糖基化酶，這類酶可以將 8-羥基鳥嘌呤從DNA中清除，以保證細胞遺傳信息的穩(wěn)定性，人與Sacharomycescerevisiae同樣存在這類修復(fù)酶。Fpg (formamidopyrimidine [fapy]-DNA glycosylase，甲酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶）也稱作 8-氧代鳥嘌呤 DNA 糖基化酶、甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg)，既有 N-端糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-端糖基化酶活性可以切下雙鏈 DNA 上受損的嘌呤堿基，產(chǎn)生一個脫嘌呤（AP）位點。AP-裂解酶活性可以切割 AP 位點的 3´ 或 5´ 端，因此可以除去 AP 位點，產(chǎn)生一個具有 3´ 和 5´ 磷酸的堿基缺口。被 Fpg 識別并切除的受損堿基包括：7，8-二羥基-8-氧代鳥嘌呤（8-氧代鳥嘌呤）、8-羥基腺嘌呤、fapy-鳥嘌呤、甲基-fapy-鳥嘌呤、fapy-腺嘌呤、黃曲霉毒素 B1-fapy-鳥嘌呤、5-羥基-胞嘧啶和 5-羥基尿嘧啶。
特性
甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg)具體有下列特點：
1. 單細胞凝膠電泳 (彗星試驗)，彗星試驗的推薦稀釋倍數(shù)，1:103～1:104
2. 堿性析出
3. 堿解旋
4. 修飾的切刻平移技術(shù)
組分
名稱
數(shù)量
Fpg (8 U/μl)
100 μl/500 μl
10X Fpg Reaction Buffer
1 ml/1 ml×2
應(yīng)用
單細胞凝膠電泳；
DNA損傷和修復(fù)研究；
SNP分析。
單位定義
1 單位指在 10 μl 反應(yīng)體系中，37℃條件下， 1 小時內(nèi)能夠切割 1 pmol 含單個與胞嘧啶配對的 8-氧代鳥嘌呤的 34 bp 寡核苷酸雙鏈所需要的酶量定義為一個活性單位。
反應(yīng)條件
10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl2 ，1mM DTT， 100 μg/ml BSA，37℃ 溫育
酶儲存液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0)， 50 mM KCl， 1 mM DTT， 50% Glycerol.
熱失活
60°C 10min。
儲存
置于-20°C可保存2年，避免反復(fù)凍融。
主要參考文獻
[1] 張海濤, 祝其鋒. 細胞中特異識別 8—羥基鳥嘌呤的修復(fù)酶[D]. , 2001.