概述^[1]

 IgG純化樹脂是采用平均粒徑為45-165 μm的4%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠經(jīng)過溴化氰活化后，再將人的IgG共價(jià)連接而成，它可以 用來純化和抗體結(jié)合的各種蛋白，例如Protein A、Protein G和分泌型表達(dá)載體pEZZ18所表達(dá)的含有兩個(gè)人工合成的Z抗體結(jié)合區(qū)的融合蛋白，提供的該IgG純化樹脂為懸浮液，純化樹脂含量為50%。

特點(diǎn)^[1]

 1. 配體為人IgG，載量6-10 mg人IgG /mL純化樹脂。

 2. 結(jié)合量為大于2 mg Protein A/mL純化樹脂。

 3. pH范圍為3-10，保存溫度2-8°C，含有20%的乙醇。

 4. 剛性強(qiáng)，流速快(300 cm/h、100 kpa)。

5. 基團(tuán)脫落少，結(jié)合特異性強(qiáng)，載量高，壽命長。

運(yùn)輸和保存條件^[1]

常溫運(yùn)輸，4°C保存，保質(zhì)期兩年，不可凍存。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備^[1]

推薦使用的緩沖液:

結(jié)合液：Tris-saline Tween 20 (TST): 50 mM Tris buffer、 pH 7.6、150 mM NaCl and 0.05% Tween 20。

洗脫液：0.5 M CHCOOH (HAc) 用 CHCOONH4 調(diào)節(jié) pH 到 3.4，或 0.1 M Glycine-HCl pH 3.0。 洗滌液：5 mM NH4Ac， pH 5.0

 操作步驟

1. 用至少5倍柱床體積的TST清洗IgG純化樹脂，以便完全去除殘留的含有乙醇的保存液。 2. 用至少2倍柱床體積的以下溶液依次平衡IgG純化樹脂一次，1) 0.5 M HAc， pH 3.4；2) TST； 3) 0.5 M HAc，pH 3.4； 最后再用2倍柱床體積的TST平衡IgG純化樹脂兩次。

3. 將所要純化的含有目的蛋白的清澈的細(xì)菌裂解液、細(xì)胞上清或培養(yǎng)基的pH調(diào)整到中性，再將樣品加入含有IgG純化樹脂 純化柱中。

4. 靜止5 min后，再用5倍柱床體積的TST清洗IgG，純化樹脂兩次；再用2倍柱床體積的5 mM NH4Ac pH 5.0清洗兩次。

5. 用0.5 M HAc pH 3.4或者0.1 M Glycine-HCl pH 3.0洗脫收集目的蛋白，同時(shí)1 M的Tris-HCl（pH 9.0左右）調(diào)節(jié)pH到中 性。 6. 采用BCA法（C503021）或（C503061）定量確定蛋白濃度,采用SDS-PAGE確定蛋白的大致純度。

參考文獻(xiàn)

[1]IgG抗體純化樹脂產(chǎn)品介紹