背景^[1][2]

細(xì)胞凋亡 (apoptosis) 是細(xì)胞為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng) 形成的一種自我死亡過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)及調(diào)控等作用。大量的光鏡及超 微結(jié)構(gòu)的研究分析證明哺乳動(dòng)物附植前的胚胎就可以觀察到細(xì)胞凋亡的發(fā)生，胚胎細(xì)胞的 凋亡有利于胚胎去除發(fā)育異常的細(xì)胞，但研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡與胚胎發(fā)育的停滯相關(guān)， 超出某一程度的凋亡不利于胚胎的發(fā)育。

因此研究著床前胚胎細(xì)胞的凋亡將有助于正確理 解胚胎的發(fā)育過(guò)程，改進(jìn)體外培養(yǎng)體系，提高胚胎質(zhì)量，解決哺乳動(dòng)物胚胎流產(chǎn)率高的問 題。半胱天冬酶家族( Caspase) 能夠啟動(dòng)和維持細(xì)胞凋亡，而其成員Caspase-3 是該細(xì)胞凋亡通路下游最重要的凋亡蛋白酶，其表達(dá)量直接反映細(xì)胞凋亡程度。

Caspase-3 是位于哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡通路下游關(guān)鍵的死亡蛋白酶。正常情況下，胞質(zhì)中的Caspase-3 以無(wú)活性的酶原形存在，細(xì)胞凋亡信號(hào)的出現(xiàn)可導(dǎo)致Caspase-3 裂解、活化，活化的Caspase-3 又進(jìn)一步導(dǎo)致蛋白酶級(jí)聯(lián)切割放大，最終使細(xì)胞走向死亡〔2， 12〕。

因此Caspase-3 表達(dá)量可以直接反映細(xì)胞凋亡程度。細(xì)胞凋亡程度Caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中最關(guān)鍵的執(zhí)行分子(key executioner)之一，可以剪切細(xì)胞凋亡過(guò)程中的許多關(guān)鍵蛋白，例如PARP。

Caspase-3的激活需要從沒有活性的全長(zhǎng)Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之間及Asp175和Ser176之間進(jìn)行剪切，產(chǎn)生有活性的17kD肽段。Caspase-3抗體可以識(shí)別全長(zhǎng)的Caspase-3(35kD)，也可以識(shí)別Caspase-3被剪切后產(chǎn)生的17kD片斷。未發(fā)現(xiàn)和其它Caspase家族蛋白有交叉反應(yīng)。

應(yīng)用^[2]

Caspase-3抗體可用于制備AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒 。所述試劑盒包括：0.6-0.8%BSA的PBS緩沖液，2.5-4%多聚甲醛的PBS緩沖液，含0.6-0.8%Triton-X-100和0.06-0.08%吐溫40的PBS緩沖液，兔抗caspase-3抗體，帶有Alexa-Fluor488綠色熒光素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，18-22μM-DAPI的PBS緩沖液。

所述兔抗caspase-3抗體是用合成的caspase-3蛋白中靠近Asp175的氨基末端殘基的多肽抗原免疫兔子獲得的多克隆抗體；兔抗caspase-3抗體按1:600的體積比稀釋于封閉液中。所述山羊抗兔IgG二抗按1:600的體積比稀釋于封閉液中；其中，所述封閉液為含10%山羊血清和0.06-0.08%吐溫40的PBS液。上述試劑盒能對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量檢測(cè)，靈敏度高、特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，效率高。

主要參考資料

[1] 孫縵利, 鄧海峰, 馬玲, 等. 美滿霉素對(duì)阿爾茨海默病大鼠前額葉皮層 CRMP-2 和 Caspase-3 表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2018, 38(17): 4236-4239. 

[2] CN201610432720.4 AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒