背景^[1-3]

RM-1小鼠前列腺癌細胞是來源小鼠前列腺癌組織的上皮細胞樣貼壁細胞，生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S，培養(yǎng)條件：CO2：5%，37℃。

5-α-雙氫睪酮可影響該細胞的生長和酸性磷酸酶的產(chǎn)生。該細胞不形成均一的單層而是成簇生長，所以傳代的時候要反復(fù)吹打形成單個細胞；該細胞貼壁不牢，達不到匯合狀態(tài)，而且會使培養(yǎng)基迅速變酸；傳代后48h內(nèi)一定要保持培養(yǎng)瓶靜止.如果此時挪動培養(yǎng)瓶，會使大部分細胞從瓶底脫落。如果出現(xiàn)此種情況，需要重新孵育24~48h使細胞重新貼壁，細胞貼壁后可更換培養(yǎng)基。

RM-1小鼠前列腺癌細胞

操作步驟：

1. 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。

2. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

3. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來。

4. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代；2~3天1次。

應(yīng)用^[4][5]

用于雷公藤內(nèi)酯醇對小鼠前列腺癌作用及其機制的研究

通過體內(nèi)、體外實驗，探討方中有效抗癌成分雷公藤內(nèi)酯醇對小鼠前列腺癌細胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能機制，以期為臨床提供安全有效的抗前列腺癌藥物。

方法：體外實驗采用小鼠前列腺癌RM-1傳代細胞，用MTT實驗檢測TL對RM-1細胞的增殖抑制作用；用吖啶橙熒光染色檢測TL對RM-1凋亡細胞形態(tài)學影響；用流式細胞術(shù)分析TL對RM-1細胞周期及凋亡峰的作用；用梯狀電泳方法檢測TL對RM-1細胞DNA的凋亡作用；用RT-PCR法檢測TL對RM-1細胞caspase-3、bcl-2 mRNA表達水平的影響。

體內(nèi)實驗采用C57BL／6小鼠皮下注射RM-1細胞，建立前列腺癌動物模型，檢測腫瘤體積和重量計算腫瘤生長抑制率；TUNEL技術(shù)檢測前列腺癌組織中凋亡細胞；免疫組化檢測方法觀察藥物對實驗動物腫瘤組織caspase-3基因及其蛋白bcl-2表達水平的影響。

結(jié)果：TL（5、10、20、40、80 ng／ml）處理后RM-1細胞生長抑制率分別為9.8％、25.1％、39.2％、48.8％、53.2％，以TL（10、20 ng／ml）處理RM-1細胞12、24、36、48h后，細胞生長抑制率分別為8.4％、25.1％、36.1％、42.4％和10.2％、39.2％、50.2％、58.5％，MTT檢測顯示雷公藤內(nèi)酯醇呈劑量和時間依賴性抑制RM-1細胞的生長。

參考文獻

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[2]Detection of circulating tumor cells in prostate cancer based on carboxylated graphene oxide modified light addressable potentiometric sensor[J].Yajun Gu,Cheng Ju,Yanjun Li,Zhiqun Shang,Yudong Wu,Yunfang Jia,Yuanjie Niu.Biosensors and Bioelectronics.2015

[3]Circulating tumor cells before and during follow-up after breast cancersurgery[J].Guus van Dalum,Gert van der Stam,Arjan Tibbe,Bas Franken,Walter Mastboom,Ivan Vermes,Marco de Groot,Leon Terstappen.International Journal of Oncology.2015(1)

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[5]張瑞.雷公藤內(nèi)酯醇對小鼠前列腺癌作用及其機制的研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學,2007.