概述^[1]

采用各種表面活性劑和蛋白變性劑使樣品快速充分破裂，從而釋放蛋白質(zhì)，內(nèi)含作用強(qiáng)烈的蛋白酶抑制劑，從而保證了蛋白的完整。組織蛋白裂解液適用于動(dòng)物組織蛋白質(zhì)的變性提取，提取的蛋白質(zhì)可以用于SDS-PAGE和Western blot 等實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸和保存條件

常溫下運(yùn)輸，收到后將溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存，溶液B在-20℃環(huán)境中保存，保質(zhì)期兩年。

操作步驟^[1] 

1. 每100 mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，手術(shù)剪剪碎成3 mm×3 mm左右的小塊，用PBS 洗滌兩次，離心取沉淀后加入1 mL 冷溶液A 和10 μL溶液B，4℃下玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿30-50次?；虺暺扑榧?xì)胞，每次30 sec，3～4次，每次間隔1 min，置于冰上冷卻。均質(zhì)或超聲破碎細(xì)胞后應(yīng)鏡檢，細(xì)胞破碎率不小于90％,并且沒有明顯的組織小塊。

2. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5 mL 預(yù)冷的離心管，冰上放置20min左右，期間取出劇烈震蕩2-3 次。再10000 rpm，4℃離心5 min。

3. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，進(jìn)行蛋白定量。

4. 分裝保存于-70℃，避免反復(fù)凍融。

使用注意事項(xiàng)^[1] 

1. 溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存，如果產(chǎn)生沉淀，可以加熱到50℃溫浴5 min，使得充分溶解。

2. 充分裂解后溶液是很透明而且不太粘的，如果裂解后溶液比較粘，可以使用超聲破碎儀，延長破碎的次數(shù)。

3. 裂解液中有較高濃度的去垢劑，不建議使用普通的Bradford 法，但可用BCA 法（ C503021）或改良Lowry 法（ C504041） 測定蛋白濃度。

4. 使用后，請旋緊瓶蓋，防止溶液揮發(fā)和與空氣的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 羅旭光 藏好晶 孫鵬 曹錫梅；篩選適合酸中毒小鼠骨骼肌組織蛋白提取的裂解液?！吨袊M織工程研究》2019年 第14期。