背景[1]
16HBE人支氣管上皮樣細胞來源于一正常人的支氣管上皮組織。后經(jīng)Ad12SV40病毒感染并克隆。該細胞可用于檢測化學和生物制劑的致癌作用。
保存方法[1]
冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
迄今為止,公司收錄背景資料清晰,細胞活力狀態(tài)良好的細胞株1420株,其中絕大部分是近年來從美國ATCC和NIH分批引進的細胞種子,少部分來自全國各地細胞研究所,細胞來源可靠,背景資料清晰,代數(shù)年輕,活力好。
注意事項[1]
1)操作前要洗手,進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2)點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
3)操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。
4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。
5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6)吸溶液的吸管等不能混用
細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
應用[1]
苯并(a)芘染毒致人支氣管上皮細胞和上皮樣成纖維細胞周期的變化
目的觀察苯并(a)芘(BaP)染毒對人支氣管上皮細胞(16HBE)和上皮樣肺成纖維細胞(W138)細胞周期影響的劑量效應和時間效應。方法 BaP 0,1,2,4,8,16和32μmol·L-1染毒16HBE和W138細胞24 h,BaP 16μmol.L-1染毒16HBE和W138不同時點(0,1,2,4,8,12和24 h),BaP 16μmol.L-1染毒16HBE和W138
參考文獻
[1]苯并(a)芘染毒致人支氣管上皮細胞和上皮樣成纖維細胞周期的變化 陳文濤范燕峰張慧濤楊瑾山西醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院勞動衛(wèi)生學教研室