pET-N-His-Thrombin-C-His
pET-N-His-Thrombin-C-His是一種用于表達(dá)N端或C端含有His標(biāo)簽(His tag)的目的蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒，也可以用于表達(dá)N端和C端都含有His標(biāo)簽的目的蛋白。本質(zhì)粒N端His標(biāo)簽后有Thrombin酶切位點(diǎn)，可通過(guò)Thrombin蛋白酶切除N端的His標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面和后面，各有一個(gè)His標(biāo)簽的編碼序列，每個(gè)His標(biāo)簽編碼6個(gè)組氨酸(6X His)。在多克隆位點(diǎn)按照讀碼框插入目的基因并帶上終止密碼子，就可以表達(dá)僅N端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在NdeI和多克隆酶切位點(diǎn)之間按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)僅C端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在多克隆位點(diǎn)按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)N端和C端都帶有His標(biāo)簽的目的蛋白。
本載體在N端His標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有Thrombin蛋白酶識(shí)別的6肽序列LVPRGS，對(duì)應(yīng)核酸序列為CTGGTGCCACGCGGTTCT，因此在目的蛋白純化后可以用Thrombin切除N端的His標(biāo)簽。Thrombin蛋白酶酶切發(fā)生在六肽序列的R和G之間，因此在酶切去除His標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GS。
通?？梢圆捎萌鏐eyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用His-tag抗體(AH367)檢測(cè)和少量地分離純化目的蛋白。
pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Kanamycin resistance ORF
563-1645
LacI coding sequence
3518-4597
His tag coding sequence
5079-5096
Thrombin recognition site sequence
5097-5129
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
5130-5177
His tag coding sequence
5178-5195
pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒(5334bp)的圖譜如下：
pET-N-His-Thrombin-C-His的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
5052
TAACTTTAAG
CATCATCATC
5102
TGGTCTGGTG
CCACGCGGTT
CTGGTATGGG
ATCCAAGCTT
CTGCAGGAAT
ACCAGACCAC
GGTGCGCCAA
GACCATACCC
TAGGTTCGAA
GACGTCCTTA
EcoRV SalI BglII
XhoI His tag
5152
TCGATATCGT
CGACAGATCT
ACCACCACCA
AGCTATAGCA
GCTGTCTAGA
TGGTGGTGGT
pET-N-His-Thrombin-C-His中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-Thrombin-C-His)包括：
AatII
Acc65I
AflII
AgeI
AhdI
AleI
AscI
AvrII
BaeI
BbvCI
BfuAI
BmgBI
BmtI
BsaI
BseRI
BsiWI
BspMI
BsrGI
BstBI
Bsu36I
CspCI
DraI
EagI
Eco53kI
FseI
KpnI
MfeI
MscI
NcoI
NheI
NotI
PacI
PmeI
PmlI
PspXI
RsrII
SacI
SacII
SbfI
ScaI
SexAI
SfiI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
SwaI
ZraI
pET-N-His-Thrombin-C-His中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-His-Thrombin-C-His once)包括：
DraIII
CAC,NNN`GTG
242
PspOMI
G`GGCC,C
4035
PsiI
TTA|TAA
370
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
4041
PvuI
CG,AT`CG
943
BstEII
G`GTNAC,C
4060
AsiSI
GCG,AT`CGC
943
MluI
A`CGCG,T
4242
TspMI
C`CCGG,G
1067
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
4563
XmaI
C`CCGG,G
1067
SphI
G,CATG`C
4771
SmaI
CCC|GGG
1069
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
NruI
TCG|CGA
1286
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
AcuI
CTGAAG(N)14,NN`
1597
XbaI
T`CTAG,A
5034
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1729
NdeI
CA`TA,TG
5074
BssSI
C`ACGA,G
1968
BamHI
G`GATC,C
5130
BstZ17I
GTA|TAC
2374
HindIII
A`AGCT,T
5136
Tth111I
GACN`N,NGTC
2399
PstI
C,TGCA`G
5142
PflFI
GACN`N,NGTC
2399
EcoRI
G`AATT,C
5148
PpuMI
RG`GWC,CY
3136
EcoRV
GAT|ATC
5156
FspI
TGC|GCA
3164
SalI
G`TCGA,C
5160
BglI
GCCN,NNN`NGGC
3182
BglII
A`GATC,T
5166
PshAI
GACNN|NNGTC
3401
XhoI
C`TCGA,G
5172
HpaI
GTT|AAC
3740
PaeR7I
C`TCGA,G
5172
BssHII
G`CGCG,C
3831
BlpI
GC`TNA,GC
5251
ApaI
G,GGCC`C
4035
StyI
C`CWWG,G
5273
pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer (5248-5267): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-His-Thrombin-C-His的全序列信息：D2908 pET-N-His-Trombin-C-His.txt。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
KL-2908-1μg
pET-N-His-Thrombin-C-His
1μg
KL-2908-100μg
pET-N-His-Thrombin-C-His
100μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pET-N-His-Thrombin-C-His說(shuō)明書(shū)；pET-N-His-Thrombin-C-His廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專(zhuān)營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾＃⒃诒本?、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。