??????pET-N-His-Thrombin-C-His是一種用于表達(dá)N端或C端含有His標(biāo)簽(His?tag)的目的蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒，也可以用于表達(dá)N端和C端都含有His標(biāo)簽的目的蛋白。本質(zhì)粒N端His標(biāo)簽后有Thrombin酶切位點，可通過Thrombin蛋白酶切除N端的His標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
??????本質(zhì)粒含有T7啟動子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點的前面和后面，各有一個His標(biāo)簽的編碼序列，每個His標(biāo)簽編碼6個組氨酸(6X?His)。在多克隆位點按照讀碼框插入目的基因并帶上終止密碼子，就可以表達(dá)僅N端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在NdeI和多克隆酶切位點之間按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)僅C端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在多克隆位點按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)N端和C端都帶有His標(biāo)簽的目的蛋白。
??????本載體在N端His標(biāo)簽與多克隆位點之間含有Thrombin蛋白酶識別的6肽序列LVPRGS，對應(yīng)核酸序列為CTGGTGCCACGCGGTTCT，因此在目的蛋白純化后可以用Thrombin切除N端的His標(biāo)簽。Thrombin蛋白酶酶切發(fā)生在六肽序列的R和G之間，因此在酶切去除His標(biāo)簽的時候會在目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GS。
??????通常可以采用如BeyoGold? His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用His-tag抗體(AH367)檢測和少量地分離純化目的蛋白。
??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒的主要信息如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒(5334bp)的圖譜如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His的多克隆位點的詳細(xì)圖譜如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-Thrombin-C-His)包括：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pET-N-His-Thrombin-C-His once)包括：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
?????? T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
??????pET-R primer (5248-5267): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-N-His-Thrombin-C-His的全序列信息：D2908 pET-N-His-Trombin-C-His.txt。
??????不同原核表達(dá)質(zhì)粒的比較和選擇，以及標(biāo)簽、蛋白酶切位點和蛋白共表達(dá)的考慮可以參考如下網(wǎng)頁：
?????? http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包裝清單：

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??????-20℃保存。
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??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
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??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。