??????pET-N-His-Thrombin-C-His是一種用于表達(dá)N端或C端含有His標(biāo)簽(His?tag)的目的蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒，也可以用于表達(dá)N端和C端都含有His標(biāo)簽的目的蛋白。本質(zhì)粒N端His標(biāo)簽后有Thrombin酶切位點(diǎn)，可通過(guò)Thrombin蛋白酶切除N端的His標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
??????本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面和后面，各有一個(gè)His標(biāo)簽的編碼序列，每個(gè)His標(biāo)簽編碼6個(gè)組氨酸(6X?His)。在多克隆位點(diǎn)按照讀碼框插入目的基因并帶上終止密碼子，就可以表達(dá)僅N端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在NdeI和多克隆酶切位點(diǎn)之間按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)僅C端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白，如果在多克隆位點(diǎn)按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)N端和C端都帶有His標(biāo)簽的目的蛋白。
??????本載體在N端His標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有Thrombin蛋白酶識(shí)別的6肽序列LVPRGS，對(duì)應(yīng)核酸序列為CTGGTGCCACGCGGTTCT，因此在目的蛋白純化后可以用Thrombin切除N端的His標(biāo)簽。Thrombin蛋白酶酶切發(fā)生在六肽序列的R和G之間，因此在酶切去除His標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GS。
??????通?？梢圆捎萌鏐eyoGold? His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用His-tag抗體(AH367)檢測(cè)和少量地分離純化目的蛋白。
??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒的主要信息如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒(5334bp)的圖譜如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-Thrombin-C-His)包括：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-His-Thrombin-C-His once)包括：

??????pET-N-His-Thrombin-C-His質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
?????? T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
??????pET-R primer (5248-5267): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-N-His-Thrombin-C-His的全序列信息：D2908 pET-N-His-Trombin-C-His.txt。
??????不同原核表達(dá)質(zhì)粒的比較和選擇，以及標(biāo)簽、蛋白酶切位點(diǎn)和蛋白共表達(dá)的考慮可以參考如下網(wǎng)頁(yè)：
?????? http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
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