pET-N-His-TEV

pET-N-His-TEV是一種用于表達(dá)N端含有His標(biāo)簽(His tag)的原核表達(dá)質(zhì)粒。本質(zhì)粒N端His標(biāo)簽后含有TEV酶切位點(diǎn)，可通過TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面，帶有一個(gè)His標(biāo)簽的編碼序列，含有6個(gè)組氨酸(6X His)。因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有His標(biāo)簽的目的蛋白。
本載體在N端His標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有TEV蛋白酶(TEV Protease)識(shí)別的七肽序列ENLYFQG，對應(yīng)的核酸序列為GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白純化后用TEV蛋白酶切除N端His標(biāo)簽。TEV蛋白酶酶切發(fā)生在七肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除His標(biāo)簽的時(shí)候目的蛋白的N端會(huì)留下一個(gè)額外的氨基酸殘基G。
通?？梢圆捎萌鏐eyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用His-tag抗體(AH367)檢測和少量地分離純化目的蛋白。
pET-N-His-TEV質(zhì)粒的主要信息如下：

pET-N-His-TEV質(zhì)粒(5304bp)的圖譜如下：

pET-N-His-TEV的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

pET-N-His-TEV中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV)包括：

pET-N-His-TEV中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV once)包括：

pET-N-His-TEV質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer (5218-5237): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-His-TEV的全序列信息：D2905 pET-N-His-TEV.txt。