??????pET-N-GST-Thrombin-C-His是一種用于表達N端含GST標簽(Glutathione?S-transferase?tag,?GST?tag)或C端含His標簽(His?tag)的重組蛋白的原核表達質粒，也可用于表達N端含GST標簽并且同時C端含His標簽的重組蛋白。GST和His雙標簽有利于通過GST柱和鎳柱兩種方法來純化目的蛋白，使目的蛋白的純度更高。本質粒N端GST標簽后有Thrombin酶切位點，可通過Thrombin蛋白酶切除N端的GST標簽。本質粒為卡那霉素抗性。
??????本質粒含有T7啟動子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導下高效啟動目的蛋白表達。在多克隆位點的前面有一個GST標簽的編碼序列，后面有一個His標簽的編碼序列，后者含有6個組氨酸(6X?His)。因此在多克隆位點根據(jù)讀碼框插入不含終止密碼子的目的基因就可以表達N端含有GST標簽并且C端含有His標簽的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加終止密碼子，這樣就可以表達僅在N端含有GST標簽的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位點之間按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達僅C端帶有His標簽的目的蛋白。
??????本載體在N端GST標簽與多克隆位點之間含有Thrombin蛋白酶識別的6肽序列LVPRGS，對應的核酸序列為CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白純化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST標簽。Thrombin蛋白酶酶切發(fā)生在六肽序列的R和G之間，因此在酶切去除GST標簽的時候會在目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GS。
??????通常可以采用如BeyoGold??GST-tag?Purification?Resin?(P2251/P2253/P2255)、GST標簽蛋白純化試劑盒(P2262)、BeyoGold??His-tag?Purification?Resin?(P2210/P2218/P2220)或His標簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質粒表達的目的蛋白，也可以使用GST抗體(AG768/AF0174)和His-tag抗體(AH367)檢測和少量地分離純化目的蛋白。
??????pET-N-GST-Thrombin-C-His質粒(5955bp)的圖譜如下：

??????pET-N-GST-Thrombin-C-His質粒的主要信息如下：

??????pET-N-GST-Thrombin-C-His的多克隆位點的詳細圖譜如下：

??????pET-N-GST-Thrombin-C-His中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：

??????pET-N-GST-Thrombin-C-His中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：

??????pET-N-GST-Thrombin-C-His質粒中推薦使用的測序引物序列如下：
??????pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
??????pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息：D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt。
??????不同原核表達質粒的比較和選擇，以及標簽、蛋白酶切位點和蛋白共表達的考慮可以參考如下網(wǎng)頁：
??????http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項：
??????本質粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。