中文名：Taq DNA 連接酶
英文名：Taq DNA Ligase
純度：40U/μl
貨號：T292950
包裝：1ml
存儲溫度：-80℃儲存
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品描述
Taq DNA 連接酶催化在含有相鄰的 5'-磷?；?3'-羥基末端的雙鏈 DNA 中使用 NAD +作為輔因子形成磷酸二酯鍵。
Taq DNA 連接酶是一種熱穩(wěn)定性連接酶，能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補靶DNA 鏈雜交的 兩條相鄰寡核苷酸鏈的5′-磷酸末端和3′-羥基末端通過磷酸二酯鍵相連。該連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷 酸鏈與互補靶DNA 完全配對，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒有空隙的條件下才可發(fā)生。因此，可以用它 來檢測單堿基替換。在45℃-65℃范圍內(nèi)，Taq DNA 連接酶均有活性。該酶在1XHiFi Taq Ligase Buffer 中具有絕佳的保真性連接。
1×Taq DNA Ligase Buffer：20 mM Tris-HCl（pH 7.6），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT， 1 mM NAD 和0.1% Triton X-100，45℃溫育。該酶需NAD+ 作輔因子，在10×Taq DNA 連接酶緩沖液 中已添加NAD+；為了延長NAD+ 的半衰期，緩沖液應(yīng)于-80℃貯存。
產(chǎn)品內(nèi)容
Taq DNA Ligase?( 40U/μl )
10×Taq DNA Ligase Buffer
來源：攜帶克隆的?Taq DNA 連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。單位活性使用 2 倍連續(xù)稀釋法測量。
體系配制（50μl）
組分 | 體積 | 終濃度 |
DNA 模板 | up to 1μg | — |
10×Taq DNA Ligase Buffer | 5μl | 1× |
Taq DNA Ligase(40 U/μL) | 2μl | 1.6U/μl |
超純水 | — | — |
體積 | 50μl | — |
反應(yīng)條件：45℃溫育 15 min。加入終止染液（50%甘油，50 mM EDTA 和溴酚蘭）終止反應(yīng)。
質(zhì)量控制分析
1)活性定義：1 單位指50μl 反應(yīng)體系中，45℃條件下，15 分鐘內(nèi)能使50% 的1μg 經(jīng)BstEII 消化的λDNA 片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。
2)蛋白濃度（OD280）測量：通過 OD280 吸光度測定。
3)物理純度評估：通過濃縮和稀釋的酶溶液的 SDS-PAGE，隨后通過銀染檢測來評估物理純度。 通過比較濃縮樣品中污染帶的總質(zhì)量與稀釋樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)帶的質(zhì)量來評估純度。
污染測試
1)單鏈核酸外切酶活性：在含有放射性標(biāo)記的單鏈 DNA 底物和 10μl 酶溶液的 50μl 反應(yīng)物中，37℃下孵育 4 小時，測定單鏈核酸外切酶活性。
2)雙鏈核酸外切酶活性：在含有放射性標(biāo)記的雙鏈 DNA 底物和 10μl 酶溶液的 50μl 反應(yīng)物中，37℃下孵育 4 小時，測定雙鏈核酸外切酶活性。
3)雙鏈內(nèi)切核酸酶活性：在含有 0.5μg 質(zhì)粒 DNA 和 10μl 酶溶液的 50μl 反應(yīng)中，37℃溫育 4 小時，測定雙鏈內(nèi)切核酸酶活性。
4)大腸桿菌16S rDNA污染檢測：使用5μl 變性酶溶液的重復(fù)樣品進(jìn)行評價，并使用對應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物在 TaqMan qPCR 測定中篩選污染性大腸桿菌基因組 DNA 的存在
。
產(chǎn)品說明 |
? 檢測 | ? SDS 純度 | ? 活性 | SS 核酸 外切酶 | DS 核酸 外切酶 | DS 核酸 內(nèi)切酶 | E.coli DNA 污染 |
測試單位 | n/a | n/a | 400 | 400 | 400 | 400 |
說明 | ＞95%
| 400,000 U/mg | <5.0% 釋放 | <1.0% 釋放 | 無轉(zhuǎn)換 | <10 個拷貝 |
?
應(yīng)用：
雙鏈DNA切刻的修復(fù)
用于Gibson組裝方法的建立查看阿拉丁官網(wǎng)此產(chǎn)品相關(guān)對應(yīng)頁面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/T292950.html
關(guān)鍵字： Taq DNA 連接酶;Taq DNA Ligase
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