PBCV DNA 連接酶也稱為SplintR 連接酶或 Chorella 病毒 DNA 連接酶，它能夠高效催化相鄰的 DNA 核苷酸的連接，這個(gè)連接過程需要一條互補(bǔ)的 RNA 在兩條 DNA 單鏈間起“夾板”或“橋梁”的固定作用。PBCV DNA連接酶的這種活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的T4 DNA連接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在內(nèi)的研究方法的創(chuàng)新。另外，在二代測(cè)序和分子診斷等眾多領(lǐng)域中，PBCV DNA連接酶是富集目的基因的理想選擇。它具有穩(wěn)定的生物活性，對(duì) RNA 介導(dǎo)固定的 DNA 底物親和性強(qiáng)（米氏常數(shù) Km = 1 nM），能夠在復(fù)雜的混合物中檢測(cè)到亞納摩爾級(jí)的特定 RNA。因此，在 RNA 檢測(cè)技術(shù)中，PBCV DNA 連接酶不失為選擇用酶。

組分

組分名稱 數(shù)量
PBCV DNA Ligase(25 U/μl) 50μl
10×PBCV Ligation Buffer 250μl

應(yīng)用

單鏈DNA的連接
基于探針法的miRNA的檢測(cè)
SNP或剪接體的檢測(cè)
RASL分析

活性定義

1 單位指 20 μl 反應(yīng)體系中，1×PBCV 連接酶反應(yīng)緩沖液，16℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 2 pmol 的DNA:RNA 雜交底物連接反應(yīng)完成50%所需的酶量。

反應(yīng)溫度及失活

該酶的反應(yīng)溫度為25度，可在16-37度之間優(yōu)化，37度可明顯提高反應(yīng)的特異性；該酶在65°C 加熱20min即可失活。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

1. 1×PBCV Ligation Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，10mM DTT。
2. 該酶對(duì)ATP的要求比較寬泛，10-100uM ATP范圍內(nèi)都可發(fā)揮活性，5mM Mg2+可顯著增加連接產(chǎn)物的量，ph為7.5-8.0。
3. 該酶對(duì)一價(jià)陽離子非常敏感，如Nacl或KCl的濃度應(yīng)低于50mM，100mM的Nacl會(huì)完全抑制連接反應(yīng)。
4. 該酶的反應(yīng)溫度為16~37℃，隨著溫度的上升酶活性會(huì)提高，但此時(shí)腺苷化產(chǎn)物也隨之增加，溫度為25 ℃。
5. 連接效率隨著夾板RNA長(zhǎng)度的減少而降低，當(dāng)長(zhǎng)度小于等于10nt時(shí)，連接效率為零。
6. 供體的5’端個(gè)堿基為“A/T”時(shí)連接效率最高。
7. 受體的3’端個(gè)堿基為“T”時(shí)連接效率最高，3’端個(gè)堿基為“G”時(shí)連接效率最差。