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植物血凝素（Phytohemagglutinin, PHA）是指從紅蕓豆（Phaseolus Vulgaris）中提取的一種菜豆類凝集素。它是由4個亞基通過非共價鍵結合形成的四聚體糖蛋白，包含兩種亞基分子，L 亞基（白細胞凝集素）和 E（紅細胞凝集素），含有 5 種異構體（L4，L3E1，L2E2，L1E3 和E4）。L 亞基具有白細胞凝集和高促有絲分裂活性；E 亞基具有高紅細胞凝集和低促有絲分裂活性。
根據不同的亞基組成，PHA可以分為幾種不同的形式，主要包括PHA-L、PHA-E、PHA-P和PHA-M。以下是它們的在科學研究中的主要用途：
PHA-L：
主要功能：PHA-L是純化的L4四聚體，主要作為T淋巴細胞的刺激原，廣泛用于免疫學研究。它可用作INF-γICS、ELISPOT實驗的陽性對照；PBMC培養(yǎng)的刺激物；順行神經示蹤劑等。
生物學活性：具有高促有絲分裂活性和白細胞凝集活性，但紅細胞凝集活性極低。
應用：主要用于刺激T細胞增殖和免疫反應研究 。
PHA-E：
主要功能：PHA-E是純化的E4四聚體，主要用途是紅細胞凝集或者糖基化修飾的研究。
生物學活性：具有高紅細胞凝集活性和低促有絲分裂活性。
應用：主要用于紅細胞凝集實驗和糖基化研究 。
PHA-P：
主要功能：PHA-P是在分離和純化PHA-L和PHA-E前的PHA的蛋白質形式，成分與PHA-M相當。
生物學活性：具有促進有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。
應用：主要用于刺激外周單個核細胞增殖，促進某些細胞因子的產生和膜表面蛋白的表達 。
PHA-M：
主要功能：PHA-M是植物血凝素的粘性蛋白形式，成分與PHA-P相當。主要用于刺激外周單個核細胞增殖，促進某些細胞因子的產生和膜表面蛋白的表達。
生物學活性：具有促進有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。
應用：廣泛用于免疫學研究，特別是在細胞增殖和細胞因子產生方面 。
客戶應用實例：
應用一、使用PHA-L（abs47014909）預刺激Jurkat T細胞，探究小分子PROTAC介導靶向蛋白降解治療STAT3依賴性上皮癌癥的機制[1]
將HCT116細胞以1×104個細胞/孔的密度接種到12孔板中進行附著，隨后用TSM-1（1μM）處理24小時。然后，使用PHA（10μg/mL）和PMA（10ng/mL）預刺激Jurkat T細胞（6×104）4小時。HCT116細胞與活化的Jurkat T細胞共培養(yǎng)24小時。ELISA試劑盒用于檢測上清液培養(yǎng)基中IL-2的水平，IL-2是監(jiān)測T細胞活化的生物標志物。用結晶紫染色法對潛在的癌癥活細胞進行虛擬化。將細胞溶解在10%乙酸中后，使用Cytation 5酶標儀（BioTek）在595nm下對細胞進行定量。
圖1 TSM-1在體外誘導T細胞活化和浸潤
應用二：使用PHA-M（abs47014911）培養(yǎng)Jurkat T細胞，探究氟化物干擾免疫系統(tǒng)的機制[2]。
Jurkat T細胞（HTX4056，Otwo Biotech）在RPMI 1640培養(yǎng)基中生長，培養(yǎng)基補充了10%胎牛血清（FBS，abs972，Absin）、青霉素-鏈霉素溶液和5ug/mL植物血凝素-M（abs47014911，Absin），5ug/mL Ultra LEAFTM純化的抗人CD28。細胞系在37°C， 5%CO2和95%空氣的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
圖2 氟化物可以抑制T細胞活化，阻礙T細胞受體的內化
PHA的不同形式主要區(qū)別在于它們的亞基組成和相應的生物學功能。PHA-L和PHA-E分別具有高促有絲分裂活性和高紅細胞凝集活性，而PHA-M和PHA-P則主要用于刺激細胞增殖和細胞因子產生。每種形式在免疫學研究和細胞生物學研究中都有其特定的應用。
參考文獻:
[1] Jin J, Wu Y, Zhao Z, et al. Small-molecule PROTAC mediates targeted protein degradation to treat STAT3-dependent epithelial cancer[J]. JCI Insight. 2022;7(22):e160606.
[2] Zhu S, Liu B, Fu G, et al. PKC-θ is an important driver of fluoride-induced immune imbalance of regulatory T cells/effector T cells[J]. Sci Total Environ. 2024;934:173081.
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