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江蘇金普諾安生物科技股份有限公司

主營產(chǎn)品:蛋白酶K,廣譜核酸酶,葡萄糖脫氫酶等

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輕松去除DNA殘留!廣譜核酸酶為你護(hù)航
發(fā)布日期:2024/7/18 9:26:33發(fā)布人:江蘇金普諾安生物科技股份有限公司

在生物制品的制備中,不可忽視DNA殘留的去除,細(xì)胞裂解釋放目標(biāo)產(chǎn)物的同時(shí),也會(huì)產(chǎn)生一些雜物。隨著越來越多的生物制品(重組蛋白、Vero細(xì)胞疫苗、細(xì)胞治療藥物等)進(jìn)入治療領(lǐng)域,核酸殘留是各類質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的重中之重。

 

圖源于pixabay

 

WHO和各國藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般控制100pg/每劑量的殘留DNA,僅限特殊情況下允許10ng/劑量。我國藥典中明確規(guī)定酵母、大腸桿菌表達(dá)的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量。

 

生產(chǎn)工藝中有多種方式去除殘留DNA,但是如果需要在更前端、更有效地去除核酸,同時(shí)減小純化壓力,目前傾向于選擇使用高效的核酸酶解——廣譜核酸酶。

 

【廣譜核酸酶】

廣譜核酸酶,又稱為全能核酸酶,一種來源于粘質(zhì)沙氏菌(Serratia marcescens,又稱靈桿菌)的非特異性核酸內(nèi)切酶。它不含有原核生物表達(dá)的細(xì)菌內(nèi)毒素。

廣譜核酸酶結(jié)構(gòu)圖|源于百度

 

在功能上,它能夠剪切各種形式DNA和RNA,無論是單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀或超螺旋形式的DNA和RNA,切斷磷酸二酯鍵從而產(chǎn)生5’-磷酸核苷酸或5’-磷酸寡核苷酸。廣譜核酸酶對(duì)核酸堿基序列無特異性要求,可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割,可用于除去生物制品中的核酸。

 

【金普諾安|產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】

· 高度穩(wěn)定性

· 比活性大于1000KU/mg蛋白

· 無動(dòng)物源性成分

· 避免原核細(xì)胞的內(nèi)毒素污染

· 不含蛋白酶殘留

· 供應(yīng)穩(wěn)定,到貨快

 

【應(yīng)用領(lǐng)域】

01.去除宿主核酸殘留

廣泛用于疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)中,可使疫苗和蛋白類產(chǎn)品核酸污染達(dá)到皮克(pg)級(jí)別。

02.促進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)來源顆粒純化

在病毒、AAV載體及包涵體等細(xì)胞來源顆粒的純化過程中,提高得率并有效提高終產(chǎn)物純度。

03.降低細(xì)胞裂解液黏度

縮短處理時(shí)間,改善分離效果,提高病毒/蛋白產(chǎn)量,利于下游層析純化操作。

04.促進(jìn)生物分析樣品純化

可用于ELISA樣品制備,色譜層析、雙相電泳及印跡分析等過程中來提高分辨率和樣品回收率。

 

—  CHIP-seq實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用  —

細(xì)胞衰老是由多種壓力引發(fā)的一種穩(wěn)定的細(xì)胞周期阻滯狀態(tài)。與此同時(shí),伴隨著細(xì)胞衰老的是大量染色質(zhì)變化的發(fā)生,這些染色質(zhì)變化被認(rèn)為是導(dǎo)致細(xì)胞衰老的原因之一。目前,研究這些變化的首選方法是染色質(zhì)免疫沉淀聯(lián)合測(cè)序技術(shù)(ChIP-Seq)。然而,在研究HIRA在衰老中的作用時(shí),科研人員發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的CHIP方案存在問題,通常無法獲得足夠的DNA量用于測(cè)序。

 

為了克服這些問題,他們利用廣譜核酸酶通過消化DNA和RNA來溶解未交聯(lián)的染色質(zhì),且不涉及蛋白酶活性,成功地進(jìn)行了HIRA的免疫沉淀,并獲得了足夠的DNA進(jìn)行illumina測(cè)序分析[1]

 

—  Vero細(xì)胞培養(yǎng)制備的應(yīng)用  —

哺乳動(dòng)物細(xì)胞特別是連續(xù)細(xì)胞系被用于生產(chǎn)疫苗和治療性生物制品,Vero細(xì)胞系是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中使用較為廣泛的載體,用于增加生物制品的產(chǎn)量。2005年,WHO推薦Vero細(xì)胞用于生產(chǎn)狂犬病疫苗,然而,包括Vero細(xì)胞系在內(nèi)的許多連續(xù)細(xì)胞系在用于制造人用疫苗時(shí)具有致瘤性。使用廣譜核酸酶可以去除Vero細(xì)胞中殘留的DNA,使宿主殘留DNA低于100pg/ml[2]

 

【產(chǎn)品性能】

 

【訂購信息】

產(chǎn)品名稱
貨號(hào)
包裝規(guī)格
廣譜核酸酶固體
GPE004001
100KU/支等
廣譜核酸酶液體
GPE004002
100KU/支等

 

 

 

 

文獻(xiàn)參考:

[1] Rai T S ,  Adams P D . ChIP-sequencing to map the epigenome of senescent cells using benzonase endonuclease[J]. Methods in Enzymology, 2016, 574:355-364.

[2] B, Si Ming Li A , et al. "Removing residual DNA from Vero-cell culture-derived human rabies vaccine by using nuclease." Biologicals 42. 5(2014):271-276.

 

 


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