背景^[1-7]

免疫染色洗滌液(10X)可用于免疫熒光(Immunofluorescence,IF)、免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)和免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry,IC)等免疫染色時(shí)固定、一抗或二抗孵育后的洗滌。適當(dāng)洗滌可以降低背景，增強(qiáng)信噪比。使用免疫染色洗滌液目的是使抗體能夠充分地進(jìn)入胞內(nèi)進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。

一般用Triton X-100、蛋白酶k等通透液。如Triton X-100可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi)，故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。在免疫組織化學(xué)（>10um厚切片）和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用Triton X-100 作為細(xì)胞通透劑，在膜上打孔。同時(shí)也是一種去污劑，一般在PBS中加入后終濃度是0.05%即可，而前者終濃度是0.5%-1%。石蠟切片4um左右可以不通透，因?yàn)榧?xì)胞已經(jīng)被切開了。

免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。

免疫組化原理：抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。

近年來，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)，使許多疑難腫瘤得到了明確診斷。在常規(guī)腫瘤病理診斷中，5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態(tài)學(xué)診斷。尤其是免疫組化在腫瘤診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可，其在低分化或未分化腫瘤的鑒別診斷時(shí)，準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。免疫染色(immunol staining)包括免疫熒光(immunol fluorescence)、免疫組化(immunol histochemistry)，免疫組化又稱免疫細(xì)胞化學(xué)(immunol cytochemistry)等。

免疫染色實(shí)驗(yàn)方法和步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備(Sample preparation)

2. 固定

3. 封閉(Blocking)

4. 一抗孵育(Primary antibody incubation)

5. 二抗孵育(Secondary antibody inucubation)

6. 蛋白檢測(cè)(Detection of proteins)

應(yīng)用^[8][9]

免疫染色洗滌液(10X)可用于免疫染色時(shí)一抗或二抗孵育后的洗滌。適當(dāng)?shù)南礈炜梢越档捅尘?、增?qiáng)信噪比。

橋本甲狀腺炎(HT)是一種常見的內(nèi)分泌疾病,女性發(fā)病是男性的3-4倍。HT的主要特征為甲狀腺功能減退癥和甲狀腺不對(duì)稱性腫大。HT的臨床診斷依賴于血清甲狀腺過氧化物酶(TPO)抗體和／或甲狀腺球蛋白(TG)抗體陽(yáng)性。這些自身抗體所致的損傷主要是由激活補(bǔ)體依賴和／或抗體依賴的細(xì)胞毒作用,產(chǎn)生TPO抗體和TG抗體所造成的。

橋本甲狀腺炎除了導(dǎo)致甲狀腺病變之外,還同一系列非甲狀腺的多器官損害相關(guān)：例如眼、肝臟、骨、腎臟、結(jié)締組織和皮膚病變。其中有些損害是由自身免疫機(jī)制導(dǎo)致的。建立甲狀腺和腎臟組織TPO抗體免疫染色的方法。對(duì)橋本甲狀腺炎患者甲狀腺和腎臟組織TPO抗體免疫染色結(jié)果進(jìn)行分析。組織TPO抗體免疫染色方法包括：組織固定、脫水、包埋、切片,以及HE染色和免疫熒光(IHF)染色。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)本包括：1.甲狀腺良性乳頭增生組織。2.乳頭狀甲狀腺癌組織。3.橋本甲狀腺炎甲狀腺組織。4.橋本甲狀腺炎腎活檢組織。對(duì)橋本甲狀腺炎患者甲狀腺和腎臟組織TPO抗體免疫染色結(jié)果進(jìn)行分析,以便對(duì)自身免疫相關(guān)的多器官損害采取早期干預(yù)措施并降低其發(fā)生機(jī)率。甲狀腺和腎臟組織TPO抗體免疫染色的方法己成功建立,主要包括組織固定、脫水、包埋、切片、HE染色和IHF染色。

橋本甲狀腺炎患者的甲狀腺組織和腎臟組織TPO抗體染色結(jié)果皆為陽(yáng)性,反映出HT患者中自身免疫相關(guān)的多器官損害。因此,在橋本甲狀腺炎及其多器官損害的發(fā)病機(jī)制中,自身免疫因素的核心重要地位得到驗(yàn)證。所以在未來應(yīng)對(duì)橋本甲狀腺炎時(shí),激素及免疫抑制治療可以起到至關(guān)重要的作用,同時(shí),患者的多器官損害狀況必須得到足夠的重視,以避免自身免疫相關(guān)性損害的發(fā)生。

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