氯化四唑藍(lán)是還原糖的靈敏試劑，可在加熱的堿性溶液中與還原糖反應(yīng)，生成不溶性的三苯福爾馬散紅色沉淀，2-脫氧D-葡萄糖雖也屬還原糖，但還原性顯著減弱。我們試用四唑藍(lán)比色法對2-脫氧-D-葡萄糖進(jìn)行了微量測定。改進(jìn)了操作步驟，提高了靈敏度，而且數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

實(shí)驗(yàn)方法

(一)試劑

1、氯化四唑藍(lán)貯備溶液：1%乙醇溶液，保存于冰箱中。

2、氯化四唑藍(lán)試劑：貯備液一份與三倍量的0.3M NaOH溶液在臨用時(shí)混合。

3、混合溶劑:氯仿-乙醇(5:4)

4、2-脫氧-D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:80pg/m1.

(二)操作步驟

從80ug/mI的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml置于帶磨口塞的試管中，依次各加水0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.0ml。在毎支試管中各加入氯化四唑藍(lán)試劑0.5ml?；靹蚝蠓湃?04℃的鹽水浴中加熱5分鐘，立即在冷水中冷卻。然后將試管中的沉淀物用少量混合溶劑溶解，轉(zhuǎn)移到25ml的容量瓶中，并稀釋到刻度。用1cm的比色皿在485nm處測吸光度。其吸光度與濃度之間的關(guān)系曲線見圖，樣品測定參照上述操作步驟進(jìn)行。

結(jié)論

Readsveld等曾用氯化四唑藍(lán)比色法測定葡萄糖、甘露糖和麥芽糖。將分析試祥與試劑混合物置于試管中，在小火上直接加熱生成紅色沉淀，用溶劑溶解，在615nm有最大吸收。我們改用水浴加熱較用小火直接加熱易于控制，且重復(fù)性好。所形成的有色絡(luò)合物的最大吸光度不在615nm處，而是485nm。表明加熱溫度不同，有色絡(luò)合物的結(jié)構(gòu)也有差異。用水浴加熱時(shí)，加熱溫度和時(shí)間都會(huì)影響顫色強(qiáng)度。另外，有色溶液的稀釋體積也要適當(dāng)。體積太小(如10ml)，溶液形成半透明的乳濁液，稀釋到50ml(Readsveld法)，則靈敏度降低一倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明稀釋到25ml較為適中。

參考文獻(xiàn)

[1]劉景芝,趙夏令.氯化四唑藍(lán)比色法測定微量2-脫氧-D-葡萄糖[J].分析化學(xué),1983,(03):196+226.