介紹

蘭瑞肽（lanreotide）是一種已經(jīng)上市的藥物，主要用于治療肢端肥大癥以及對于手術和(或)放射療法不應答的患者，或者不適合進行手術和(或)放射療法治療的患者。外觀為白色凍干塊狀。

蘭瑞肽

合成

現(xiàn)有合成的缺點

蘭瑞肽含有一對二硫鍵，對于二硫鍵的合成，一般采用鏈上固相合成，即采用氧化劑碘直接在樹脂上形成二硫鍵。或者將線性肽從樹脂上裂解下來后，在液相中采用碘或雙氧水形成二硫鍵。CN110330560A介紹了一種lanreotide的合成方法，其先采用固相方法合成蘭瑞肽全保護肽，然后將全保護肽溶解于溶液中，采用碘氧化的方式形成二硫鍵，然后再脫除保護基團，獲得lanreotide，產(chǎn)品存在0.4％以上的二聚體。

蘭瑞肽的序列中有易被碘代的Tyr殘基，所以采用碘在樹脂上氧化和液相氧化存在Tyr氧化雜質的風險，同時，強氧化劑碘的使用使二聚體的可能性大大增加。采用雙氧水氧化時，需將氧化液體系調至p H值為堿性，但此肽在堿性條件下溶解度差，在p H為7.2以上時，肽在溶液情況下析出，無法氧化。以上常規(guī)氧化方法不適于蘭瑞肽的二硫鍵形成，二聚體雜質較多，純度較低。

新合成方法

宓鵬程[1]提供一種蘭瑞肽的制備方法，使得該方法獲得的蘭瑞肽收率和純度較高、雜質少。具體步驟如下：

第一步：稱取替代度為1 .0mmol/g的Rink  Amide  Resin樹脂100g于固相反應柱中，加入DMF，氮氣鼓泡溶脹60分鐘；稱取Fmoc?Thr(t Bu)?OH  39 .8克(100mmol)、HOBt16 .2克(120mmol)，用DMF溶解，0℃下加入20.3m L(120mmol)DIC,活化5分鐘，加入反應柱。反應兩小時后，加入70m L醋酸酐和60m L吡啶，混合封閉24小時，DCM洗滌三次，甲醇收縮后抽干樹脂，得到Fmoc?Thr(t Bu)?Rink  Amide  Resin樹脂，檢測替代度為0.62mmol/g。

第二步：稱取上一步制備的替代度為0 .50mmol/g的Fmoc?Thr(t Bu)?Rink  Amide?MBHA Resin樹脂100g于固相反應柱中，加入DMF，氮氣鼓泡溶脹60分鐘；然后用DBLK脫保護6min+8min，DMF洗滌6次。稱取87.8g(150mmol)Fmoc?Cys(Trt)?OH和24.3g(180mmol)HOBT用DMF溶解，冰水浴下加入28.1m L(180mmol)DIPCDI活化3min后，將混合液加入到反應柱中，室溫反應2小時，以茚三酮檢測反應終點(如樹脂無色透明則終止反應；如樹脂顯色則延長反應1小時)。反應結束，用DMF洗滌樹脂3次，加入DBLK脫保護6min+8min，DMF洗滌樹脂6次，茚三酮檢測樹脂有顏色。重復上述偶聯(lián)操作，按照肽序依次偶聯(lián)Fmoc?Val?OH、Fmoc?Lys(Boc)?OH、Fmoc?D?Trp(Boc)?OH、Fmoc?Tyr(t Bu)?OH、Fmoc?Cys(Trt)?OH、Fmoc?Nal?OH，得到肽樹脂178.9g。

第三步：將上一步得到的肽樹脂178.9克加入到3L三口瓶中，加入預先配置好預冷至0攝氏度以下的TFA:EDT:苯甲硫醚：苯甲醚＝90：5：3：2(V:V)1.79L，室溫反應2小時，過濾樹脂，收集濾液。用少量TFA洗滌樹脂，合并濾液。將濾液緩慢加入17.9L冰乙醚中沉淀，離心，冰乙醚洗滌5次，減壓干燥得粗肽55.5克，重量收率101.6％。

第四步：稱取上一步中Nal?Cys?Tyr?D?Trp?Lys?Val?Cys?Thr?NH2線性粗肽55 .5g(50mmol)，用18.5L純化水溶解，配置成3mg/ml的水溶液。量取12.1ml(150mmol)NCS加入反應液中，攪拌反應60min，HPLC檢測無線性肽原料存在，得到Nal?cyclo[Cys?Tyr?D?Trp?Lys?Val?Cys]?Thr?NH2溶液。直接用高效液相純化制備。以反相十八烷基硅烷為固定相，純化(純化體系為：A相：0.1％TFA，B相：乙腈，梯度：B％＝21％?41％(60min))，收集目的峰餾分，濃縮凍干，得純品蘭瑞肽33.9g，純度大于99.5％，總收率61.9%。

參考文獻

[1]宓鵬程,王亮,潘俊鋒,等.一種蘭瑞肽的制備方法[P].甘肅省:CN202110907954.0,2021-10-08.