背景^[1-7]

c-Kit Rabbit Monoclonal Antibody（c-Kit兔單克隆抗體)是用c-Kit蛋白對小鼠進行系統(tǒng)免疫再取出脾臟細胞賽選出只分泌單一c-Kit蛋白抗體的B淋巴細胞，再將此B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行雜交。最后制得分泌單一c-Kit蛋白抗體和無限增值的雜交細胞。

肥大/干細胞生長因子受體（SCFR），也稱為原癌基因c-Kit或酪氨酸蛋白激酶試劑盒或CD117，是一種受體酪氨酸激酶蛋白，在人類中由KIT基因編碼。已發(fā)現(xiàn)該基因編碼不同同種型的多種轉(zhuǎn)錄物變體。KIT最初由德國生物化學(xué)家Axel Ullrich于1987年描述為貓肉瘤病毒致癌基因v-kit的細胞同源物。CD117是在造血干細胞以及其他細胞類型的表面上表達的細胞因子受體。這種受體的改變形式可能與某些類型的癌癥有關(guān)。CD117是一種受體酪氨酸激酶III型，它與干細胞因子（一種導(dǎo)致某些類型細胞生長的物質(zhì)）結(jié)合，也被稱為“鋼因子”或“c-kit配體”。

當(dāng)該受體與干細胞因子（SCF）結(jié)合時，它形成二聚體這會激活其內(nèi)在的酪氨酸激酶活性，從而磷酸化并激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，從而在細胞中傳播信號。通過CD117的信號傳導(dǎo)在細胞存活，增殖和分化中起作用。該基因中的激活突變與胃腸道間質(zhì)瘤，睪丸精原細胞瘤，肥大細胞病，黑色素瘤，急性髓性白血病相關(guān)，而失活突變與遺傳缺陷花斑病有關(guān)。

CD117的抗體廣泛用于免疫組織化學(xué)，以幫助區(qū)分組織學(xué)組織切片中的特定類型的腫瘤。它主要用于診斷GIST，其對CD117呈陽性，但對desmin和S-100等標記物呈陰性，其在平滑肌和神經(jīng)腫瘤中呈陽性，具有相似的外觀。在GIST中，CD117染色通常是細胞質(zhì)的，沿著細胞膜具有更強的強化。CD117抗體還可用于診斷肥大細胞腫瘤和區(qū)分精原細胞瘤與胚胎癌。

研究應(yīng)用^[8]

c-Kit兔單克隆抗體可用于研究胃腸道間質(zhì)瘤中c-kit和PDGFRA基因突變的檢測和臨床診斷。

胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突變狀況,為進一步的生物靶向治療提供依據(jù)。方法用免疫組織化學(xué)EnVision法、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增和直接測序的方法,檢測165例GISTc-kit基因9、11、13和17號外顯子突變以及PDGFRA基因12和18號外顯子突變。

結(jié)果病理組織學(xué)診斷的165例GIST病例中有155例(94%)免疫組織化學(xué)顯示CD117陽性。在CD117陽性的GIST中,c-kit基因總突變率為76·1%(118/155):分別為11號外顯子67·1%(104/155)、9號外顯子7·1%(11/155)、13號外顯子1·3%(2/155)和17號外顯子0·6%(1/155)。絕大多數(shù)為雜合性突變,少數(shù)為純合性突變。11號外顯子的突變位點多集中在5′端的經(jīng)典熱點,其次為3′端的框內(nèi)串聯(lián)重復(fù)。

后者主要以核分裂象少的老年女性胃部病例多見。9號外顯子突變代表一類發(fā)生在年輕男性體積較大的小腸病變。13號外顯子發(fā)現(xiàn)一處新的突變點L641P。PDGFRA基因突變見于50%(5/10)CD117陰性病例,均為18號外顯子突變,包括常見的D842V點突變和一個框內(nèi)843~846處IMHD缺失伴有S847T的新突變。

PDGFRA基因突變多見于發(fā)生在后腹膜/網(wǎng)膜的具有高度侵襲危險性的病例。結(jié)論中國GIST病例大多數(shù)存在c-kit基因和PDGFRA基因的突變,且在基因突變類型和腫瘤原發(fā)部位間有非隨機的聯(lián)系。除了發(fā)現(xiàn)幾個新的突變形式外,國人的GIST似乎和西方國家有些不同的突變特點。靶向治療需要基因突變分型的啟示和指導(dǎo)。

參考文獻

[1] Andre C,Hampe A,Lachaume P,Martin E,Wang XP,Manus V,Hu WX,Galibert F(January 1997)."Sequence analysis of two genomic regions containing the KIT and the FMS receptor tyrosine kinase genes".Genomics.39(2):216–26.

[2] "Entrez Gene:KIT v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog".

[3] National Cancer Institute Dictionary of Cancer Terms.c-kit.Accessed October 13,2014.

[4] Yarden Y,Kuang WJ,Yang-Feng T,Coussens L,Munemitsu S,Dull TJ,Chen E,Schlessinger J,Francke U,Ullrich A(November 1987)."Human proto-oncogene c-kit:a new cell surface receptor tyrosine kinase for an unidentified ligand".EMBO J.6(11):3341–51.PMC 553789.PMID 2448137.

[5] Edling CE,Hallberg B(2007)."c-Kit--a hematopoietic cell essential receptor tyrosine kinase".Int.J.Biochem.Cell Biol.39(11):1995–8.

[6] Leong,Anthony S-Y;Cooper,Kumarason;Leong,F Joel W-M(2003).Manual of Diagnostic Cytology(2 ed.).Greenwich Medical Media,Ltd.pp.149–151.ISBN 978-1-84110-100-2.

[7] Purohit R(2014)."Role of ELA region in auto-activation of mutant KIT receptor:a molecular dynamics simulation insight".Journal of Biomolecular Structure&Dynamics.32(7):1033–46.

[8] 賀慧穎,方偉崗,鐘鎬鎬,李燕,鄭杰,杜娟,衡萬杰,吳秉銓.165例胃腸道間質(zhì)瘤中c-kit和PDGFRA基因突變的檢測和臨床診斷意義[J].中華病理學(xué)雜志,2006(05):262-266.