背景[1-3]
小鼠白介素2 ELISA試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中白介素2的含量或活性。
實(shí)驗(yàn)原理：
小鼠白介素2 ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）。往預(yù)先包被小鼠白介素2(IL-2)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白介素2(IL-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。
小鼠白介素2 ELISA試劑盒
標(biāo)本要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
應(yīng)用[4][5]
用于雷帕霉素聯(lián)合調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)受體小鼠移植心臟及抗腫瘤免疫的影響研究
研究短期使用雷帕霉素聯(lián)合調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell,Treg）在誘導(dǎo)同種異體小鼠心臟移植物長期存活,同時(shí)探討此方案對(duì)移植受體腫瘤免疫的影響。
方法：免疫磁珠法分離得到受體小鼠脾臟Treg,經(jīng)CD3/CD28單克隆抗體磁珠及2000 U/mL重組小鼠白介素2（recombinant murine IL-2,rmIL-2）體外擴(kuò)增后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)純度;建立小鼠腹腔同種異體心臟移植模型（H-2b到H-2d）,分為對(duì)照組（單純移植）、雷帕霉素組、雷帕霉素聯(lián)合Treg組。雷帕霉素組連續(xù)14 d經(jīng)腹腔注射雷帕霉素1mg/（kg·d）,雷帕霉素聯(lián)合Treg組注射相同劑量的雷帕霉素,并于移植當(dāng)天經(jīng)尾靜脈過繼輸注擴(kuò)增后的Treg（1×107/只）,同時(shí)設(shè)同基因移植組（H-2d到H-2d）,每日觀察移植心臟搏動(dòng)并在相應(yīng)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。
在受體腫瘤免疫實(shí)驗(yàn)中設(shè)三組同種異體心臟移植（H-2b到H-2d）,同時(shí)經(jīng)尾靜脈過繼輸注B16-F10細(xì)胞（H-2b）（供體來源）,另三組同種異體心臟移植（H-2d到H-2b）小鼠經(jīng)尾靜脈過繼輸注B16-F10細(xì)胞（H-2b）（受體來源）,兩周后比較肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量。結(jié)果CD4+CD25+Foxp3+Treg擴(kuò)增前純度為86.68%±0.02%（n=5）,體外加入擴(kuò)增2周后Treg數(shù)量達(dá)到了初始數(shù)量的3040倍,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+Treg純度為84.58%±0.03%,與擴(kuò)增前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
對(duì)照組移植心臟中位生存時(shí)間（MST）為7 d,雷帕霉素組為15 d,雷帕霉素聯(lián)合Treg過繼輸注能夠顯著延長移植心臟MST至93 d,組織學(xué)顯示長期存活心臟淋巴細(xì)胞浸潤及慢性血管病變;對(duì)于供體來源腫瘤,對(duì)照組未見腫瘤結(jié)節(jié),雷帕霉素組為（15±8）個(gè),雷帕霉素聯(lián)合Treg組小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)為（14±7）個(gè),后2組類似無顯著性差異;對(duì)于受體來源腫瘤,對(duì)照組腫瘤結(jié)節(jié)為（70±12）個(gè)、雷帕霉素組為（28±9）個(gè)、雷帕霉素聯(lián)合Treg組小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)為（146±12）個(gè),與對(duì)照組、雷帕霉素組相比均顯著增加。結(jié)論短期使用低劑量雷帕霉素聯(lián)合Treg能夠顯著延長小鼠移植心臟的存活時(shí)間,但仍不能抑制受體腫瘤的發(fā)生。
參考文獻(xiàn)
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