培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn), 但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn), 必須通
過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。
       鑒別和確定支原體污染, 已知的方法有直接培養(yǎng)法, 支原體特異酶檢測(cè), RNA標(biāo)記法, 放射自顯影法, PCR技術(shù)以及DNA
熒光染色法。上述檢測(cè)方法中, 除DNA熒光染色法檢測(cè)外, 都需要較長(zhǎng)的時(shí)間以及多種實(shí)驗(yàn)設(shè)備及試劑支持, 操作步驟
也比較煩瑣。
       DNA熒光染色檢測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)是既靈敏, 又非?？焖佟Ｓ袔追NDNA熒光染料如DAPI、氮芥喹吖因、二鹽酸喹吖因等, 但它
們都不如Hoechst的熒光染色效果好。Hoechst染料的特點(diǎn)是緩慢淬火和最低的本底熒光。
       MP Biomedicals的支原體染色試劑盒(Mycoplasma Stain Kit)用于在培養(yǎng)細(xì)胞中原位染色檢測(cè)支原體或其它原核生物。該試劑盒的原理是DNA熒光染色檢測(cè)法, 采用的熒光染料為Hoechst 33258。Hoechst染色后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果
, 污染的類型可以根據(jù)其形態(tài)、大小以及其與培養(yǎng)的細(xì)胞的相互關(guān)系來(lái)確定。熒光顯微鏡下, 支原體是存在于胞質(zhì)中的大小均一的熒光小點(diǎn)或短棒(絲狀物), 而其他污染物的體積則會(huì)更大一些并且熒光更亮。

結(jié)果
       樣本應(yīng)該在熒光顯微鏡下以400~1000X油鏡鏡頭觀察(激發(fā)波長(zhǎng)：360nm；發(fā)射波長(zhǎng)：490~500nm)。通過(guò)陽(yáng)性和陰性對(duì)照玻片與結(jié)果的比較, 可以很容易的辨認(rèn)出支原體。

未污染培養(yǎng)
       在未被污染的培養(yǎng)物中只有細(xì)胞核被染色, 偶爾會(huì)出現(xiàn)從死細(xì)胞或破損細(xì)胞中釋放的呈球形的微核或其他的核碎片,它們與支原體相比, 體積更大并且熒光更亮。

污染的培養(yǎng)
       被污染的培養(yǎng)中可以觀察到細(xì)胞核被許多熒光小亮點(diǎn)包圍著, 他們的直徑普遍在0.1~0.3μm之間并且具有多形性, 形態(tài)可以從球形一直到細(xì)絲狀。