MPBio生產(chǎn)的LSM,成功地用泛影酸鈉代替了甲泛影酸鈉,是一種滅菌過濾溶液,每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克泛影酸鈉。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。
1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合 2. 無菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。 3. 混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2 ml 生理鹽水 4. 仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM(室溫)于15ml離心管中,在血液和LSM中形成一個明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。 5. 室溫下400g離心15-30分鐘,離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時可以在LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞,如上圖所示。 6. 吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。 7. 吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中,室溫離心10分鐘,離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻,例如160 – 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。 8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
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