"KYSE-270細(xì)胞：人食道鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞生長：貼壁
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：５傳代
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
細(xì)胞生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細(xì)胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細(xì)胞的實驗穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套；３)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)；５)晚上離開的時候給傳代細(xì)胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。
細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項：１.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項尤為重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細(xì)胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細(xì)胞，這個是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇，結(jié)果無異常。５.細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時１ml細(xì)胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇１管細(xì)胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細(xì)胞濃度過低，不利于細(xì)胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細(xì)胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細(xì)胞傳代的一般方法：開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-０.２%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或１９９等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（１萬單位）、７.５％NaHC０３溶液、０.２５％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(１００m１)、克氏瓶、膠塞、吸管(１０ml、１m１）、細(xì)胞吹打管（２０ml）(以上用具需經(jīng)１２１℃至少１５分鐘高壓滅菌)、C０２ 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、４℃、-２０℃冰箱；操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-０.２%LH培養(yǎng)液１００ml內(nèi)，加入滅活小牛血清１０m１，慶大霉素溶液０.３m１，７.５%碳酸鈉溶液３ml。（僅供一般參考）。消化細(xì)胞；先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面１-２次，每次１０m１，棄去洗液，向細(xì)胞瓶內(nèi)加入０.２５％胰蛋白酶溶液，每瓶１m１，細(xì)胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入１０m１細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(１００m１)中，再加入１０m１細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于３７±１℃孵箱培養(yǎng)。約２～４天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定)；填寫傳代記錄。
WiDrTC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-251細(xì)胞、H-1954細(xì)胞、CHO-K1細(xì)胞
KYSE-450細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MHHCALL2細(xì)胞、LA-N-1細(xì)胞、SW480細(xì)胞
LIXC002細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCI/AML4細(xì)胞、Becker細(xì)胞、PC2細(xì)胞
578T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ME1細(xì)胞、MES 23.5細(xì)胞、HT 29細(xì)胞
JOSK-M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNO-1細(xì)胞、Colo699細(xì)胞、HcaF細(xì)胞
Hi-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1438細(xì)胞、SNU-C2A細(xì)胞、As-PC1細(xì)胞
HOC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LIXC-002細(xì)胞、H1092細(xì)胞、OVCA420細(xì)胞
Colo-678細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SupB15WT細(xì)胞、Hela-mock細(xì)胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細(xì)胞
H1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV-CA 432細(xì)胞、KCL22S細(xì)胞、YAC細(xì)胞
Psi-2-DAP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAC-E2G8細(xì)胞、IEC-6細(xì)胞、OKa-C-1細(xì)胞
SGC-7901細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH596細(xì)胞、NK-92細(xì)胞、V-79-4細(xì)胞
RPMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RA-FLSs細(xì)胞、NeHepLxHT細(xì)胞、H2286細(xì)胞
MDA-1386細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：786-0細(xì)胞、VMM-5A細(xì)胞、SK BR 03細(xì)胞
NCIH2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs840T細(xì)胞、Mino細(xì)胞、IEC6細(xì)胞
Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-869細(xì)胞、SK-Col-1細(xì)胞、D341細(xì)胞
SUM-159細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1341細(xì)胞、HS5細(xì)胞、JurkatE6-1細(xì)胞
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PCI:SG231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCTC-1469細(xì)胞、NCI747細(xì)胞、A10細(xì)胞
COC1/CDDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UCLA RO-81A-1細(xì)胞、IFRS1細(xì)胞、DHL-6細(xì)胞
SN12C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H727細(xì)胞、D283-MED細(xì)胞、TJ905細(xì)胞
K562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM52細(xì)胞、LWnt-3A細(xì)胞、EO771細(xì)胞
NIH:OVCAR-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Super Tube細(xì)胞、HDLM-2細(xì)胞、IMR32細(xì)胞
QSG-7701細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 626細(xì)胞、Y3-Ag1.2.3細(xì)胞、RPTC細(xì)胞
HBL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U2-OS細(xì)胞、VSMC細(xì)胞、D324細(xì)胞
PNT1/A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1599細(xì)胞、Hs729T細(xì)胞、NRK-49F細(xì)胞
SNU-C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NGP細(xì)胞、GLAG-66細(xì)胞、Ly7細(xì)胞
C4-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-024細(xì)胞、NCI-H1693細(xì)胞、MDAMB453細(xì)胞
RMS1598細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1355細(xì)胞、T2細(xì)胞、Ramos 1細(xì)胞
Sp2/0-Ag-14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1404細(xì)胞、SW 1463細(xì)胞、MCAEC細(xì)胞
PL-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IOSE-29細(xì)胞、NCIH508細(xì)胞、NPC-039細(xì)胞
GP293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KU 812細(xì)胞、CL-11細(xì)胞、BMSC/hBMSCs細(xì)胞
H446細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUIT 2細(xì)胞、OV-CA 432細(xì)胞、SF 767細(xì)胞
Hs-675-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HO8910細(xì)胞、C4 I細(xì)胞、RPMI-8226S細(xì)胞
MRC-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Huh7.5細(xì)胞、SW 780細(xì)胞、ST2細(xì)胞
MuM-2C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs688(A)T細(xì)胞、Calu6細(xì)胞、OV2008細(xì)胞
4175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR433細(xì)胞、MDCK II細(xì)胞、Human Melanoma Cell Bowes細(xì)胞
HOP-62細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LK2細(xì)胞、HUTU80細(xì)胞、T24細(xì)胞
SNU16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CAL39細(xì)胞、FL 62891細(xì)胞、RIN14B細(xì)胞
NCIH1648細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NRK-49F細(xì)胞、Hs343T細(xì)胞、NS-1細(xì)胞
GM 2132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM04154B細(xì)胞、GI-1細(xì)胞、EFM-192A細(xì)胞
HPAF/CD18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MUS-M1細(xì)胞、PANC 813細(xì)胞、BSC-40細(xì)胞
RKO-AS45-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0827細(xì)胞、MDA-MB-468-RED細(xì)胞、OCI Ly19細(xì)胞
MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GLRK 13細(xì)胞、EJ1細(xì)胞、HTR-8/SVneo細(xì)胞
MDAMB231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MUTZ-1細(xì)胞、PANC-08-13細(xì)胞、H128細(xì)胞
Ball 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KM-H2細(xì)胞、HMEC1細(xì)胞、GM03569B細(xì)胞
HUT28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 320 HSR細(xì)胞、KS-1 [Human glioblastoma]細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞
CT 26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI/ADR-RES細(xì)胞、CMT 64細(xì)胞、GM-346細(xì)胞
HRVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCK-81細(xì)胞、COLO_320DM細(xì)胞、L-6細(xì)胞
293/EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS-180細(xì)胞、Line 870 Emory University-4細(xì)胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone細(xì)胞
CCFSTTG1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CORL105細(xì)胞、HSAEC1-KT細(xì)胞、HCC2279細(xì)胞
RSC 96細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ej138細(xì)胞、SKMEL-31細(xì)胞、IEC 18細(xì)胞
HUT 28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1666細(xì)胞、SNU-475細(xì)胞、MEG-01細(xì)胞
EU-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PANC0203細(xì)胞、Vero 76細(xì)胞、DHL-5細(xì)胞
X63-Ag 8.6.5.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MX1細(xì)胞、FRH-0201細(xì)胞、H-1581細(xì)胞
RC13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：JF305細(xì)胞、BE2-C細(xì)胞、HSC5細(xì)胞
LICR-LON-HN6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NW-38細(xì)胞、HOP-62細(xì)胞、H2023細(xì)胞
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RH35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs606T細(xì)胞、SK-N-BE(2)C細(xì)胞、HCE-T細(xì)胞
GM03671C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：JTC-28細(xì)胞、MCF7ADR細(xì)胞、U-118 MG細(xì)胞
NCI-H510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1755細(xì)胞、BE(2)M17細(xì)胞、BI-Mel細(xì)胞
HUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QG-56細(xì)胞、HCC0078細(xì)胞、CL1-5細(xì)胞
Lewis lung carcinoma line 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA157細(xì)胞、IPEC-1細(xì)胞、SNU119細(xì)胞
HTR-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2330細(xì)胞、MDA-157細(xì)胞、V 79細(xì)胞
MCA-205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK-293 c18細(xì)胞、NCI-SNU-1040細(xì)胞、Nb2a細(xì)胞
TM3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HRCEC細(xì)胞、NS653細(xì)胞、HSC-1細(xì)胞
MCF 7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：293-GP細(xì)胞、MyLa2059細(xì)胞、NCI-H2444細(xì)胞
PGLH7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHL-11細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞、OACP4C細(xì)胞
HCC0015細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COV434細(xì)胞、IBMF-7細(xì)胞、IMCD-3細(xì)胞
3T3-F442A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：rRTEC細(xì)胞、SK-LU-1細(xì)胞、Panc 05.04細(xì)胞
Reh細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CA922細(xì)胞、BT-474細(xì)胞、FHs74 Int細(xì)胞
H735細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 934.T細(xì)胞、NCIH69細(xì)胞、SK.MEL.2細(xì)胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A375SM細(xì)胞、DMS53細(xì)胞、UMR 106細(xì)胞
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ACHN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ACC2細(xì)胞、H-295R細(xì)胞、MPC-5細(xì)胞
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