"Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:脈絡(luò)從;上皮;SV40永生化;SD大鼠 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來(lái)要注意什么問(wèn)題呢?沒(méi)錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來(lái)復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開(kāi)始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^(guò)1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒(méi)有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問(wèn)題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過(guò)這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說(shuō),人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 DHL-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-1細(xì)胞、CAL-51細(xì)胞、PTK 2細(xì)胞 Leukemic 1210細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2108細(xì)胞、H-1693細(xì)胞、Co320細(xì)胞 FDC-P1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMT-93細(xì)胞、NCTC clone 929細(xì)胞、COLO 829細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前,細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來(lái)凍存細(xì)胞。對(duì)于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細(xì)胞條件無(wú)血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞凍存:計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以1×10(7)到5×10(7)細(xì)胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無(wú)血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細(xì)胞凍存:使用分離試劑從基層分離細(xì)胞,分離時(shí)盡可能溫和,使對(duì)細(xì)胞的損傷減少到最小。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細(xì)胞,確定有活力細(xì)胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以5×10(6)到1×10(6)細(xì)胞/ml密度,在凍存液中懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 CCLP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細(xì)胞、CORL51細(xì)胞、A20細(xì)胞 H-748細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel624細(xì)胞、MARC 145細(xì)胞、SK-RC 39細(xì)胞 Hs-274-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GI-1細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞、Pfeiffer細(xì)胞 Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QBC(939)細(xì)胞、JB 6細(xì)胞、HIT T15細(xì)胞 HCC70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1819細(xì)胞、KHYG-1細(xì)胞、MCF-10 Attached細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) 常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)中一些問(wèn)題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過(guò)20%,因?yàn)楹窟^(guò)低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過(guò)高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購(gòu)買(mǎi)的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 TE7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1417細(xì)胞、CPA 47細(xì)胞、UM-UC-14細(xì)胞 RL-65細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266S細(xì)胞、MNNG-HOS (Cl#5)細(xì)胞、MDA468細(xì)胞 MRASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tohoku Hospital Pediatrics-1細(xì)胞、EC9706細(xì)胞、CCD-18Co細(xì)胞 GOTO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MTC-TT細(xì)胞、OV 1063細(xì)胞、KRC-Y細(xì)胞 NCI-H676B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J82細(xì)胞、CPAE細(xì)胞、A-427細(xì)胞 NCI-H2195細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細(xì)胞、HEK 293 EBNA細(xì)胞、VMCUB1細(xì)胞 CAL78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-296細(xì)胞、Hs 737.T細(xì)胞、OEC19細(xì)胞 MonoMac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-3細(xì)胞、95C細(xì)胞、C38細(xì)胞 Nittby-Salford 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FAK+/+細(xì)胞、H-1522細(xì)胞、Dx5細(xì)胞 IPLB-Sf21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-2008細(xì)胞、HNTEC細(xì)胞、KYSE-510細(xì)胞 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細(xì)胞系 MNNG-HOS (Cl#5)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31-FUJ細(xì)胞、HCGC細(xì)胞、Hi-5細(xì)胞 SU-86-86細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCA 7細(xì)胞、NCIH820細(xì)胞、OVCA8細(xì)胞 NCI-H2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 684細(xì)胞、D6P2T細(xì)胞、University of Arizona Cell Culture-893細(xì)胞 CCD841CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-72細(xì)胞、MFM223細(xì)胞、U-343細(xì)胞 DH-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-03-27細(xì)胞、CMT167細(xì)胞、BC-009細(xì)胞 BHP-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細(xì)胞、FCCH1018細(xì)胞、OE33細(xì)胞 BHP-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細(xì)胞、FCCH1018細(xì)胞、OE33細(xì)胞 Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs822T細(xì)胞、SNU-449細(xì)胞、U266 B1細(xì)胞 HFT 8810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-85-1細(xì)胞、MPC 11細(xì)胞、HEC-151細(xì)胞 CCRF/CEM/0細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9c2(2-1)細(xì)胞、HCC-1419細(xì)胞、H661細(xì)胞 TGBC-11-TKB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI7951細(xì)胞、J82 COT細(xì)胞、LC-1 sq細(xì)胞 INS1-E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801-95D細(xì)胞、WEHI 3B細(xì)胞、COLO 699細(xì)胞 OAW-42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNDZ細(xì)胞、Granta519細(xì)胞、NCIH2085細(xì)胞 Tb1Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-774細(xì)胞、SUM-52細(xì)胞、BE(2)C細(xì)胞 MV-4:11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159-PT細(xì)胞、FHs74 Int細(xì)胞、H-1755細(xì)胞 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carcinoma]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHSY5Y細(xì)胞、QBI-293A細(xì)胞、NCIH1623細(xì)胞 NCIH23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:mIMCD-3細(xì)胞、SUPM2細(xì)胞、U-118-MG細(xì)胞 SUM159PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS153細(xì)胞、KMH2細(xì)胞、BJA-B-1細(xì)胞 BJA-B1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Me Wo細(xì)胞、Granta 519細(xì)胞、TR146細(xì)胞 AR-42J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC4細(xì)胞、RAEC細(xì)胞、RCC_7860細(xì)胞 FHs74Int細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D341細(xì)胞、KP-N-RT-BM細(xì)胞、CAL85-1細(xì)胞 Med 341細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:373MG細(xì)胞、HG2855細(xì)胞、U-87 MG細(xì)胞 Capan-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-1細(xì)胞、SNU-520細(xì)胞、RPMI1846細(xì)胞 HO1N1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Case 3細(xì)胞、Clone M-3細(xì)胞、VMM5A細(xì)胞 293 H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC5細(xì)胞、NCI-H2291細(xì)胞、H-125細(xì)胞 HCC202細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKM1細(xì)胞、WEHI 164 TC細(xì)胞、SUDHL16細(xì)胞 HCC202細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKM1細(xì)胞、WEHI 164 TC細(xì)胞、SUDHL16細(xì)胞 Epstein-Barr-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIT T-15細(xì)胞、HCC1359細(xì)胞、MDCC-MSB-1細(xì)胞 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