PCR 擴(kuò)增試劑盒

貨號(hào)：RE0225

規(guī)格：50T/100T

保存：-20℃

試劑盒組成：

產(chǎn)品說明：

Taq DNA Polymerase 是從克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為 94 KD。該酶具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 5’-3’核酸外切酶活性，無 3’-5’外切酶活性。在 PCR 反應(yīng)中，Taq DNA Polymerase 延伸速度為 1-2 kb/分鐘，產(chǎn)物 3’端帶A，可直接用于 T/A 載體克隆。該酶無外源核酸酶和細(xì)菌基因組 DNA 的污染，穩(wěn)定性好，特異性強(qiáng)。

使用本試劑盒快速簡便，可用于PCR相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室工作。

影響PCR反應(yīng)的因素很多，即使使用經(jīng)高度優(yōu)化的PCR Master 也會(huì)遇到問題。如果發(fā)現(xiàn)PCR反應(yīng)沒有得所需產(chǎn)物或條帶較弱，建議用25mmol/L MgCl₂ 調(diào)節(jié)反應(yīng)體系中的Mg²⁺濃度，以期獲得更好的結(jié)果。

使用方法：

1. 模板DNA準(zhǔn)備：基因組DNA，反應(yīng)體系中模板濃度推薦范圍1-10 μg/ml；質(zhì)?；蚴删wDNA濃度0.1-1ng/ml。

2. 在無菌潔凈的PCR管中，參考下面體系配制反應(yīng)溶液。

3. 輕輕混勻后短暫離心。

注：在同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)平行反應(yīng)時(shí)，在一個(gè)離心管中將單組分混合均勻，分裝到 PCR 管中，再依次加入 MgCl₂和模板 DNA。

4. 加適量的礦物油后，置于 PCR 儀中進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。

注：對(duì)于有熱蓋的 PCR 儀可不加礦物油。

5. PCR反應(yīng)循環(huán)設(shè)置

94℃     3min

94℃     30sec

55℃     30sec            30 cycles

72℃   500-2000bp/1min

72℃     5min

6. 結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后，取5μl反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1. PCR 能夠從很少量的分子開始獲得超過 1 千萬拷貝數(shù)的目標(biāo) DNA 序列。其敏感性要求模板不能被實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中其他 DNA 或以前的擴(kuò)增產(chǎn)物所污染。

2. DNA 模板的準(zhǔn)備，反應(yīng)混合物的調(diào)配，PCR 反應(yīng)過程以及隨后的產(chǎn)物分析都應(yīng)在不同的地方分開操作。

3. 建議使用帶有紫外燈的超凈臺(tái)來混合反應(yīng)混合物。每一步PCR 操作都應(yīng)該使用新的手套。

4. 要求 PCR 反應(yīng)所需試劑分開配制。

5. 溶液應(yīng)分裝成小計(jì)量單位并保存在指定存放 PCR 試劑的地方。試劑應(yīng)該與其他 DNA 模板分開存放。

6. 為了確定無污染，應(yīng)該同時(shí)做一個(gè)不含 DNA 模板的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)。

7. 50 µl 體系不同濃度 Mg²⁺所需 MgCl₂ 溶液體積：

8. 本產(chǎn)品僅供科研使用。