顯色基質(zhì)鱟試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(終點(diǎn)顯色法，含偶氮化試劑)

貨號(hào)：SK0020

規(guī)格：100ml

保存：陰涼處，2-8℃，避光貯存。

產(chǎn)品內(nèi)容：

細(xì)菌內(nèi)毒素工作品，5支

鱟試劑， 1.7ml/支，5支

顯色基質(zhì)，1.7ml/支，5支

偶氮化試劑1，10ml/支，5支

偶氮化試劑2，10ml/支，5支

偶氮化試劑3，10ml/支，5支

HCl (反應(yīng)終止劑)， 50ml/瓶，1瓶

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，50ml/瓶，3瓶

用途：

顯色基質(zhì)鱟試劑( Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate，CE TAL )用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的定量檢測(cè)，禁止以任何途徑進(jìn)入機(jī)體。

原理：

鱟試劑為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品，鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH值及無(wú)干擾物質(zhì)），細(xì)菌內(nèi)毒素激活C 因子，引起一系列酶促反應(yīng)，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì)，使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm） 。在一定時(shí)間內(nèi)，pNA的生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。

同時(shí)，對(duì)硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色（λmax = 545nm），避免了供試品本身的顏色對(duì)405nm處吸收峰的干擾。

檢測(cè)限：

按反應(yīng)時(shí)間不同可檢測(cè)0.1EU/ml-1 EU/ml 和0.01EU/ml -0.1EU/ml 兩個(gè)區(qū)間( 反應(yīng)時(shí)間T 1 和T2 見(jiàn)出廠檢驗(yàn)報(bào)告)。

用法：

1. 材料和設(shè)備

1.1 試劑

鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素工作品、顯色基質(zhì)、偶氮化試劑1 、偶氮化試劑2 、偶氮化試劑3、HCl (反應(yīng)終止劑) 、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水。

1.2 器材

無(wú)熱原試管、無(wú)熱原吸頭、旋渦混合儀、移液器、多道移液器、封口膜、試管架、恒溫水浴箱（37±1℃）、分光光度計(jì)。

注意：接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無(wú)熱原的(我公司提供無(wú)熱原耗材)。

玻璃器皿可經(jīng)250℃干烤至少60 分鐘去除熱原。

2. 供試品的貯存與預(yù)處理

備注：若供試品為血液類(lèi)，請(qǐng)參照我廠配套血液相關(guān)處理試劑使用說(shuō)明書(shū)。

2.1 供試品的pH 值應(yīng)在6 - 8 之間，若超出此范圍，需用無(wú)熱原緩沖液、0.1N 氫氧化鈉或0.1N 鹽酸調(diào)節(jié)。

2.2 若供試品中可能存在鱟實(shí)驗(yàn)的干擾物質(zhì)，處理參見(jiàn)【供試品的干擾試驗(yàn)】。

2.3 若供試品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖會(huì)產(chǎn)生G 因子旁路反應(yīng)，干擾內(nèi)毒素檢測(cè)），需選用特異性鱟試劑（我公司提供）。

2.4 若供試品為一些抗菌素如頭孢類(lèi)抗菌素和磺胺制劑會(huì)對(duì)偶氮染色劑產(chǎn)生偶聯(lián)反應(yīng)而干擾偶氮化顯色，需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒（我公司提供）。

2.5 若供試品的本底吸光度值大于0.5，必須對(duì)供試品進(jìn)行稀釋后再檢測(cè)。

2.6 若供試品顏色較深(例如溶血)，或在酸性條件下顏色加深(例如一些組織培養(yǎng)介質(zhì))，必須設(shè)置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。供試品空白管不加入鱟試劑，以等體積鱟試劑的溶劑(該處為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水)代替。其余操作同供試品管。

3. 實(shí)驗(yàn)操作

3.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為0.01， 0.025， 0.05， 0.1 EU/ml 或0.1， 0.25， 0.5， 1.0EU/ml。稀釋方法如下（以0.1， 0.25， 0.5， 1.0 EU/ml 為例）：取細(xì)菌內(nèi)毒素工作品1 支，按細(xì)菌內(nèi)毒素工作品使用說(shuō)明書(shū)稀釋為10EU/ml 的內(nèi)毒素溶液，再稀釋為1.0EU/ml 的內(nèi)毒素溶液，以1.0EU/ml 的內(nèi)毒素溶液為母液按下表稀釋成0.1，0.25，0.5， 1.0 EU/ml 的濃度梯度。配制好的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在4 小時(shí)內(nèi)用完。

表1 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.2 陰性對(duì)照為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水。

鱟試劑：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑完全溶解，注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應(yīng)在10 分鐘內(nèi)用完。

顯色基質(zhì)：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中，輕輕振搖使顯色基質(zhì)完全溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無(wú)污染的條件下于4 oC 貯存8 小時(shí)以?xún)?nèi)。

偶氮化試劑1：按標(biāo)示量加反應(yīng)終止劑鹽酸于偶氮化試劑1 中，

偶氮化試劑2：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑2 中，

偶氮化試劑3：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑3 中，偶氮化試劑溶液可于4oC貯存1 周。