SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

貨號(hào)：PN1200

規(guī)格：25T/50T

保存：2-8℃，避光，有效期1年。

產(chǎn)品組成：

*使用前按每克PAGE膠凝固劑加蒸餾水10mL配置成10%溶液，并分裝成小體積后凍存于-20℃。

*檢測(cè)SDS溶液是否澄清，若出現(xiàn)絮狀物或沉淀可放37℃片刻至溶解，不影響效果。

產(chǎn)品說(shuō)明：

本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需的全套試劑，客戶(hù)只需自備制膠器具和蒸餾水，即可配PAGE膠(即聚丙烯酰胺凝膠) ，方便、快捷、實(shí)惠。本試劑盒不僅可用于配制SDS-PAGE凝膠，也可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒約可配制25/50塊常規(guī)大小的PAGE膠。

操作步驟(僅供參考)：

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠濃度，凝膠濃度見(jiàn)附表1。

一、灌制分離膠（各試劑使用量見(jiàn)附表3）

1、參照凝膠模具說(shuō)明書(shū)，裝配好凝膠模具。

注：上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。

2、將不同體積的30%Acr/Bis(29:1)、1.5mol/L Tris(pH8.8)、10%SDS和雙蒸水在燒杯或試管中混合。

3、加入10%PAGE膠凝固劑和PAGE膠促凝劑，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的水層，使凝膠表面保持平整。）

5、靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

二、灌制濃縮膠（各試劑使用量見(jiàn)附表2）

1、去除覆蓋在分離膠上的水層。

2、將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、1.0mol/L Tris(pH6.8)、10%SDS和純水在小燒杯或試管中混合。

3、加入10%PAGE膠凝固劑和PAGE膠促凝劑，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。

7、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

8、進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

附表

附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與分離范圍

附表2. 配制5%SDS-PAGE濃縮膠

附表3. 配制SDS-PAGE分離膠

注意事項(xiàng)：

1、10%PAGE膠凝固劑配制后分裝-20℃保存。10%PAGE膠凝固劑溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；10%PAGE膠凝固劑溶液在4℃有效期為一周。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換使用-20℃保存的PAGE膠凝固劑溶液。

2、10%SDS在低溫情況下容易析出，配置之前請(qǐng)確保10%SDS溶液澄清透明。若有析出，可37℃水浴溶解后使用。

3、PAGE膠促凝劑易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。

4、PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及PAGE膠凝固劑、PAGE膠促凝劑的用量密切相關(guān)；在其它條件不變的情況下，可通過(guò)改變PAGE膠凝固劑及PAGE膠促凝劑的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚合過(guò)快不利于操作；附表中的PAGE膠凝固劑、PAGE膠促凝劑的用量可供參考，應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

5、在凝膠配制過(guò)程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

6、在分離膠上層加純水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。

7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。