| 產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
| D2701-100μg |
pCMV-N-BFP (藍(lán)色熒光蛋白) |
100μg |
1086.00元 |
??????pCMV-N-BFP是碧云天自行研發(fā)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)N端含BFP(Blue Fluorescent Protein, 藍(lán)色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)BFP的完整編碼序列，因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有BFP標(biāo)簽的融合蛋白。利用BFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位，也可以利用BFP抗體來(lái)檢測(cè)或免疫沉淀融合蛋白。BFP與GFP高度相似，可嘗試用GFP抗體檢測(cè)BFP。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可以使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
??????pCMV-N-BFP質(zhì)粒的主要信息如下：
|
Feature Nucleotide
|
Position
|
|
CMV promoter
|
1-602
|
|
T3 promoter and T3 primer binding site
|
620-639
|
|
BFP
|
677-1393
|
|
Multiple cloning site
|
1394-1483
|
|
T7 promoter and T7 primer binding site
|
1503-1524
|
|
SV40 polyA signal
|
1536-1919
|
|
f1 origin of ss-DNA replication
|
2057-2363
|
|
bla promoter
|
2388-2512
|
|
SV40 promoter
|
2532-2870
|
|
Neomycin/kanamycin resistance ORF
|
205-3696
|
|
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
|
3697-4155
|
|
pUC origin
|
4284-4951
|
??????pCMV-N-BFP質(zhì)粒(5003bp)的圖譜如下：
??????pCMV-N-BFP的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
|
SacIBFP
|
|
|
|
651
|
GAGCTCTAGC
|
GCTACCGGTC
|
|
TGAGCAAGGG
|
|
|
|
|
|
CTCGAGATCG
|
CGATGGCCAG
|
|
ACTCGTTCCC
|
|
|
|
|
701
|
TTCACCGGGG
|
TGGTGCCCAT
|
CCTGGTCGAG
|
CTGGACGGCG
|
|
|
|
|
|
AAGTGGCCCC
|
ACCACGGGTA
|
GGACCAGCTC
|
GACCTGCCGC
|
|
|
|
|
751
|
CCACAAGTTC
|
AGCGTGTCCG
|
GCGAGGGCGA
|
GGGCGATGCC
|
|
|
|
|
|
GGTGTTCAAG
|
TCGCACAGGC
|
CGCTCCCGCT
|
CCCGCTACGG
|
|
|
|
|
801
|
AGCTGACCCT
|
GAAGTTCATC
|
TGCACCACCG
|
GCAAGCTGCC
|
|
|
|
|
|
TCGACTGGGA
|
CTTCAAGTAG
|
ACGTGGTGGC
|
CGTTCGACGG
|
|
|
|
|
851
|
CCCACCCTCG
|
TGACCACCCT
|
GAGCCACGGC
|
GTCCAGTGCT
|
|
|
|
|
|
GGGTGGGAGC
|
ACTGGTGGGA
|
CTCGGTGCCG
|
CAGGTCACGA
|
|
|
|
|
901
|
CCCCGACCAC
|
ATGAAGCAGC
|
ACGACTTCTT
|
CAAGTCCGCC
|
|
|
|
|
|
GGGGCTGGTG
|
TACTTCGTCG
|
TGCTGAAGAA
|
GTTCAGGCGG
|
|
|
|
|
951
|
GCTACGTCCA
|
GGAGCGCACC
|
ATCTTCTTCA
|
AGGACGACGG
|
|
|
|
|
|
CGATGCAGGT
|
CCTCGCGTGG
|
TAGAAGAAGT
|
TCCTGCTGCC
|
|
|
|
|
1001
|
ACCCGCGCCG
|
AGGTGAAGTT
|
CGAGGGCGAC
|
ACCCTGGTGA
|
|
|
|
|
|
TGGGCGCGGC
|
TCCACTTCAA
|
GCTCCCGCTG
|
TGGGACCACT
|
|
|
|
|
1051
|
GCTGAAGGGC
|
ATCGACTTCA
|
AGGAGGACGG
|
CAACATCCTG
|
|
|
|
|
|
CGACTTCCCG
|
TAGCTGAAGT
|
TCCTCCTGCC
|
GTTGTAGGAC
|
|
|
|
|
1101
|
TGGAGTACAA
|
CTTCAACAGC
|
CACAACGTCT
|
ATATCATGGC
|
|
|
|
|
|
ACCTCATGTT
|
GAAGTTGTCG
|
GTGTTGCAGA
|
TATAGTACCG
|
|
|
|
|
1151
|
AAGAACGGCA
|
TCAAGGCGAA
|
CTTCAAGATC
|
CGCCACAACA
|
|
|
|
|
|
TTCTTGCCGT
|
AGTTCCGCTT
|
GAAGTTCTAG
|
GCGGTGTTGT
|
|
|
|
|
1201
|
CAGCGTGCAG
|
CTCGCCGACC
|
ACTACCAGCA
|
GAACACCCCC
|
|
|
|
|
|
GTCGCACGTC
|
GAGCGGCTGG
|
TGATGGTCGT
|
CTTGTGGGGG
|
|
|
|
|
1251
|
GCCCCGTGCT
|
GCTGCCCGAC
|
AGCCACTACC
|
TGAGCACCCA
|
|
|
|
|
|
CGGGGCACGA
|
CGACGGGCTG
|
TCGGTGATGG
|
ACTCGTGGGT
|
|
|
|
|
1301
|
AGCAAAGACC
|
CCAACGAGAA
|
GCGCGATCAC
|
ATGGTCCTGC
|
|
|
|
|
|
TCGTTTCTGG
|
GGTTGCTCTT
|
CGCGCTAGTG
|
TACCAGGACG
|
|
|
|
|
BamHI HindIII
|
|
|
|
1351
|
GACCGCCGCC
|
GGGATCACTC
|
TCGGCATGGA
|
CGAGCTGTAC
|
|
|
|
|
|
CTGGCGGCGG
|
CCCTAGTGAG
|
AGCCGTACCT
|
GCTCGACATG
|
|
|
|
|
PstI EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
|
|
1401
|
AGCTTCTGCA
|
GGAATTCGAT
|
ATCGTCGACA
|
GATCTCTCGA
|
GTCTAGAACT
|
|
|
TCGAAGACGT
|
CCTTAAGCTA
|
TAGCAGCTGT
|
CTAGAGAGCT
|
CAGATCTTGA
|
|
ApaI
|
|
1451
|
AGTGGGCCCG
|
GTACCTTAAT
|
TAATTAAGGT
|
ACC
|
|
|
|
TCACCCGGGC
|
CATGGAATTA
|
ATTAATTCCA
|
TGG
|
|
??????pCMV-N-BFP中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-BFP)包括：
|
AclI
|
AflII
|
AhdI
|
AscI
|
AsiSI
|
BaeI
|
BbsI
|
|
BbvCI
|
BlpI
|
BmgBI
|
BsiWI
|
BsmBI
|
BspEI
|
BspQI
|
|
BssHII
|
BstEII
|
BstXI
|
BstZ17I
|
EarI
|
EcoNI
|
FseI
|
|
PspXI
|
SapI
|
SbfI
|
ScaI
|
SgrAI
|
SmaI
|
SwaI
|
|
TspMI
|
XcmI
|
XmaI
|
XmnI
|
|
??????pCMV-N-BFP中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pCMV-N-BFP once)包括：
|
NdeI
|
CA`TA,TG
|
240
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
1534
|
|
SnaBI
|
TAC|GTA
|
346
|
|
BclI
|
T`GATC,A
|
1690
|
|
CspCI
|
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
|
380
|
|
MfeI
|
C`AATT,G
|
1783
|
|
NheI
|
G`CTAG,C
|
597
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
1796
|
|
BmtI
|
G,CTAG`C
|
597
|
|
BtsI
|
GCAGTG,NN`
|
1870
|
|
SacI
|
G,AGCT`C
|
651
|
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
1919
|
|
Eco53kI
|
GAG|CTC
|
653
|
|
BsaXI
|
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
|
2080
|
|
AfeI
|
AGC|GCT
|
660
|
|
DraIII
|
CAC,NNN`GTG`
|
2146
|
|
AgeI
|
A`CCGG,T
|
664
|
|
SfiI
|
GGCCN,NNN`NGGCC
|
2805
|
|
BcgI
|
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
|
765
|
|
StuI
|
AGG|CCT
|
2854
|
|
BsrGI
|
T`GTAC,A
|
1386
|
|
ClaI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
1394
|
|
BspDI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
1400
|
|
EagI
|
C`GGCC,G
|
2939
|
|
PstI
|
C,TGCA`G
|
1406
|
|
KasI
|
G`GCGC,C
|
3032
|
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
1412
|
|
PluTI
|
G,GCGC`C
|
3032
|
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
1420
|
|
NarI
|
GG`CG,CC
|
3033
|
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
1424
|
|
SfoI
|
GGC|GCC
|
3034
|
|
AccI
|
GT`MK,AC
|
1425
|
|
MscI
|
TGG|CCA
|
3115
|
|
BglII
|
A`GATC,T
|
1430
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
|
BsoBI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BsrDI
|
GCAATG,NN`
|
3264
|
|
AvaI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
RsrII
|
CG`GWC,CG
|
3549
|
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BstBI
|
TT`CG,AA
|
3715
|
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
1442
|
|
BsaI
|
GGTCTCN`NNNN,
|
4022
|
|
SpeI
|
A`CTAG,T
|
1448
|
|
ApaLI
|
G`TGCA,C
|
4637
|
|
PspOMI
|
G`GGCC,C
|
1454
|
|
PciI
|
A`CATG,T
|
4951
|
|
ApaI
|
G,GGCC`C
|
1454
|
|
??????pCMV-N-BFP質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
??????N-BFP primer (1284-1303): 5′-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3′
??????T7 primer (1503-1524): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
??????pCMV-N-BFP的全序列信息：D2701 pCMV-N-BFP-seq.txt
??????pCMV-N-BFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請(qǐng)參考圖1。
圖1. pCMV-N-BFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果圖。左側(cè)為明場(chǎng)照片，右側(cè)為熒光照片。
包裝清單：
|
產(chǎn)品編號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
D2701-1μg
|
pCMV-N-BFP (藍(lán)色熒光蛋白)
|
1μg
|
|
D2701-100μg
|
pCMV-N-BFP (藍(lán)色熒光蛋白)
|
100μg
|
|
—
|
說(shuō)明書
|
1份
|
保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。