??????TEV?Protease是一種在大抽桿菌中重組表達(dá)的帶His標(biāo)簽(6X?His?tag)的煙草蝕紋病毒(Tobacco?Etch?Virus,?TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特異性地識別七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione?S-transferase (GST)、His或者其它標(biāo)簽的蛋白酶。
??????建議把GST或His等標(biāo)簽設(shè)計(jì)在融合蛋白的N端，并在GST或His等標(biāo)簽與目的蛋白之間設(shè)計(jì)加入TEV?Protease專一性識別與酶切的上述七肽序列。這樣在GST或His標(biāo)簽被酶切后，在目的蛋白的N端僅有一個(gè)額外的Gly/Ser氨基酸殘基，從而限度地減少了對目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的影響。構(gòu)建含有TEV?Protease專一性識別位點(diǎn)的目的蛋白表達(dá)質(zhì)粒，可以考慮選購碧云天的質(zhì)粒pET-N-His-TEV?(P2905)。
??????TEV?Protease的的酶切溫度是30℃，但在4-30℃和pH6.0-8.5范圍內(nèi)皆有活性。因此在實(shí)際操作過程中，為盡量保留目的蛋白的結(jié)構(gòu)和生物活性，建議在4℃酶切過夜。
??????TEV?Protease還有一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)是在400mM咪唑中仍有較高活力，因此對于很多用鎳柱純化的His標(biāo)簽?zāi)康牡鞍?，可直接將TEV?Protease加入含高濃度咪唑的剛剛純化的目的蛋白溶液中，在4℃邊透析去除咪唑邊進(jìn)行酶切。當(dāng)然也可以在透析后再用TEV?Protease進(jìn)行酶切以去除His標(biāo)簽。經(jīng)過酶切的目的蛋白，溶液中帶有His標(biāo)簽的本TEV?Protease以及切除下來的His標(biāo)簽，都可以通過與鎳柱結(jié)合而去除。His標(biāo)簽蛋白的純化可以考慮選購碧云天的BeyoGold??His-tag?Purification?Resin?
(P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)。
??????酶活性單位定義：30℃，pH8.0條件下反應(yīng)1小時(shí)，能夠切割3μg對照底物達(dá)85%以上所需的酶量為一個(gè)活性單位。
??????碧云天TEV?Protease酶活性鑒定結(jié)果可參考圖1。

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?????????圖1.TEV?Protease切割GST標(biāo)簽蛋白的效果圖。含有TEV?Protease識別位點(diǎn)的76kD?GST標(biāo)簽蛋白與TEV?Protease進(jìn)行反應(yīng)，
?????????底物的用量為3μg，酶的用量依次為0、0.1、0.25、0.5、0.67、1、2U，30°C在1X?TEV?Buffer中反應(yīng)1小時(shí)后取樣進(jìn)行
?????????SDS-PAGE電泳和考馬斯亮藍(lán)染色。酶切產(chǎn)物大小為約50kD的目的蛋白和約26kD的GST標(biāo)簽。

??????TEV?Protease分子量大小約28kDa，純度：≥95%。
??????TEV?Protease儲存液組成為：25mM?Tris-HCl, 150mM?NaCl, 1mM?EDTA, 5mM?DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0。
??????10X?TEV?Buffer組成為：500mM?Tris-HCl, 500mM?NaCl, 5mM?EDTA, 10mM?DTT, pH8.0。
??????本產(chǎn)品一個(gè)包裝含有1000單位的酶，可用于約3mg帶有TEV?Protease識別位點(diǎn)的融合蛋白的切割。
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。