本試劑盒用于快速?gòu)母栺R林固定、石蠟包埋組織樣品中提取RNA包括microRNA。獨(dú)特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞釋放出RNA，然后裂解混合物通過一個(gè)基因組DNA清除柱，基因組DNA被清除而RNA穿透濾過。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。得到的RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品組分：
裂解液——————15ml
結(jié)合液——————25 ml
漂洗液——————10ml
蛋白酶K——————20mg（可選）
RNase-free H2O——————10ml
基因組DNA清除柱和收集管——————50套
RNA吸附柱和收集管室溫——————50套

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品RNA提取操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。
3.試劑盒的獨(dú)特基因組清除柱和配方確保有效清除基因組DNA殘留，一般情況下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。
4.多次柱漂洗確保RNA高純度，可直接用于下游各種實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 樣品處理量絕對(duì)不要超過基因組DNA清除柱和RNA吸附柱處理能力，否則造成DNA殘留或者產(chǎn)量降低。不同組織細(xì)胞種類RNA/DNA相差極大，例如胸腺脾臟DNA含量豐富，超過5mg就會(huì)超過柱子處理能力。COS細(xì)胞RNA含量豐富，超過3x106細(xì)胞就會(huì)超過柱子吸附能力。所以開始摸索實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時(shí)寧可使用較少的樣品處理量，如不超過2個(gè)10μm厚度石蠟切片。將來根據(jù)樣品試驗(yàn)情況增加或者減少處理量。
3. 裂解液PKD、結(jié)合液RBC中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 預(yù)防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1) 經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。
2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3) RNA提取過程中應(yīng)使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC 至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
5. 關(guān)于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留（DNase 消化也無法做到100%無殘留），本試劑盒采取了本公司獨(dú)特的緩沖體系和基因組DNA 清除柱技術(shù)，絕大多數(shù)DNA 已經(jīng)被清除，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR 和熒光定量PCR。個(gè)別特殊情況如DNA 含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA 表達(dá)量分析熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí)：
1) 選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA 中的連接區(qū),這樣DNA 就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA 和cDNA 上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對(duì)。
6. RNA 純度及濃度檢測(cè)：
完整性： RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15 分鐘)檢測(cè)完整性。由于石蠟包埋組織福爾馬林固定和包埋過程中一般由于RNA 與蛋白反應(yīng)交聯(lián)會(huì)導(dǎo)致RNA 斷裂或者降解，一般電泳后UV下只能看到模糊彌散（smear）帶型，隨著儲(chǔ)存的時(shí)間越長(zhǎng)，降解斷裂越嚴(yán)重，甚至只能看到峰值僅僅在100bp 左右的模糊條帶。這都屬于RNA 提取正常情況。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的參考指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測(cè)定所用溶液的pH 值影響。同一個(gè)RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測(cè)出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測(cè)讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純。
濃度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free 水將分光光度計(jì)調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD260, OD280 測(cè)定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的計(jì)算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期9個(gè)月。

本制品別名：石蠟包埋組織microRNA提取試劑盒|石蠟包埋組織microRNA分離試劑盒|石蠟包埋組織microRNA純化試劑盒|石蠟包埋組織miRNA分離試劑盒|石蠟包埋組織miRNA純化試劑盒|石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒|石蠟包埋組織總RNA純化試劑盒