石蠟包埋切片蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)石蠟包埋組織是很重要的臨床材料，研究其正常細(xì)胞和疾病相關(guān)的細(xì)胞，特 別是癌細(xì)胞中標(biāo)記蛋白的差異表達(dá)水平，對(duì)于判斷癌化的進(jìn)展，癌癥的類(lèi)型的判 定，以方便于診斷和治療有重要的意義，然而體外培養(yǎng)的細(xì)胞的蛋白差異表達(dá)水 平并不能夠真實(shí)反映體內(nèi)細(xì)胞的真實(shí)狀況，因此從石蠟包埋組織中提取蛋白并且 加以研究有很重要的意義，本試劑盒通過(guò)特殊的快速脫蠟試劑和蛋白質(zhì)抽提試 劑，在兩種不同的溫度條件下溫育，可以將被鉸鏈的蛋白質(zhì)釋放出來(lái)，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單 的離心步驟，上清中含有的蛋白經(jīng)過(guò)沉淀洗滌和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D電泳或蛋白質(zhì)芯片分析等，本試劑盒可以使 用50次左右。 本產(chǎn)品有下列特點(diǎn)：

1. 不含有去污試劑，適用于非染色的標(biāo)本。
規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 小扁盒包裝
預(yù)處理試劑 A LM130888A 100 mL
預(yù)處理試劑 B LM130888B 5 mL
提取試劑 LM130888C 5mL
沉淀試劑 LM130888D 75mL
DTT 干粉 LM130888E 80mg
使用手冊(cè) LM130888sc 1份

運(yùn)輸及保存 常溫下運(yùn)輸和保存，但 DTT 和提取試劑需要 4℃保存，盛裝預(yù)處理試劑 A 的瓶 子已經(jīng)密封，請(qǐng)?jiān)谑褂煤?，將剩余的預(yù)處理試劑 A 倒入一個(gè)有內(nèi)蓋的瓶中，同 時(shí)蓋緊內(nèi)外蓋，以防止揮發(fā)。盛裝預(yù)處理試劑 A，B 和沉淀試劑的瓶蓋要蓋緊， 同時(shí)避免火源。

自備試劑 超純水 

使用方法

1. 取兩塊大約10-15 μm厚，100 mm2石蠟包埋組織切片到1.5 mL 的干凈 離心管中，加入1mL 預(yù)處理試劑A，高速渦懸震蕩30 sec，室溫靜置5 min， 期間偶爾顛倒離心管數(shù)次。

2. 加入100 μL預(yù)處理試劑B，渦懸震蕩10 sec，再10000 rpm（10000 g） 離心2 min，移去上下兩層的液體。

3. 用500 μL的超純水清洗脫蠟的組織兩次，離心并盡量吸去液體，保留組織 塊沉淀。

4. 加入100μL提取試劑（用前需要將DTT全部加入到裝提取試劑的瓶中，搖晃 混勻，未用完的提取試劑需要4℃放置），蓋上蓋子，渦懸震蕩數(shù)秒。

5. 在水浴鍋中100℃加熱20 min，短暫離心一下，再用組織研磨棒將切片組 織磨碎。

6. 在水浴鍋中60℃加熱2 hour，期間大約每20 min取出，震蕩一次。

7. 4℃，12000 rpm（12830 g）離心15 min，小心將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 的干凈離心管中。注意：在上清中的蛋白質(zhì)可以在4℃的環(huán)境條件 下保存一個(gè)星期，如果需要長(zhǎng)期保存，請(qǐng)放置在-20℃的環(huán)境中，同時(shí)避免 反復(fù)凍溶，也可以使用我公司生產(chǎn)的非干擾型蛋白濃度測(cè)定試劑盒對(duì)上清中 的蛋白質(zhì)直接定量。

8. 加入1 mL 的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環(huán)境中保持10 min。

9. 4℃，12000 rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀。

10. 加入0.5 mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環(huán)境中保持10 min， 再4℃，12000 rpm離心15 min，去除上清， 保留沉淀，在通風(fēng)櫥中將試 管倒置在濾紙上，讓殘余的液體揮發(fā)干凈。

11. 將固體沉淀溶解于合適的自備的緩沖液中，再4℃，12000 rpm 離心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等實(shí)驗(yàn)。注意：此上清 中含有DNA，RNA 殘留，所以溶液有些發(fā)粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase 等消化，有助于減少粘性，但是即使不處理一般不 會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，用槍頭將沉淀?yè)v碎。建議使用含有Thiourea ，Urea， NDSB-201 或其它強(qiáng)溶解能力的去污試劑的緩沖液有利于沉淀的完全溶 解。 

2. 可以適用于甲醛浸泡的組織標(biāo)本。

3. 不需要超速離心，可以同時(shí)處理多個(gè)標(biāo)本。