D-luciferin，potassium salt熒光素產(chǎn)品說明書

發(fā)光原理

哺乳動物生物發(fā)光，一般是將Firefly luciferase基因（由554個氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株，當細胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時, 熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達?；?、細胞和活體動物都可被熒光素酶基因標記。將標記好的細胞接種到實驗動物體內(nèi)后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassium salt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應才可以發(fā)光，因此只有在活細胞內(nèi)才會產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強度與標記細胞的數(shù)目線性相關(guān)。

結(jié)構(gòu)與性能

熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個小時，只有活細胞才能夠持續(xù)表達熒光素酶。

(1) 熒光素不會影響動物的正常生理功能。

(2) 熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。

(3) 熒光素在體內(nèi)擴散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進入動物體內(nèi)。腹腔注射擴散較慢，持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達熒光素酶的細胞開始發(fā)光，10min后強度達到穩(wěn)定的最高點，在最高點持續(xù)約20~30 min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，檢測時間是在注射后15~35min之間；若進行熒光素靜脈注射，擴散快，但發(fā)光持續(xù)時間很短?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實驗總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。

(4) 觀察時間的間隔沒有最短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程，但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對下一次觀察結(jié)果的影響。

儲存與運輸

一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運輸放在4℃環(huán)境。

應用領(lǐng)域

腫瘤，干細胞，藥物開發(fā)，基因治療，轉(zhuǎn)基因小鼠，免疫學等等。

成像效果

1. 檢測靈敏度（所用細胞為本公司生物發(fā)光的肝癌細胞）

從左到右依次注射的細胞為100個，1000個，10000個；曝光時間依次為20秒，5秒，5秒。所用儀器為本公司的NightOWL Ⅱ LB983 NC100活體成像系統(tǒng)。檢測地點為中國軍事醫(yī)學科學院。  

1. 成像效果展示（所用細胞為本公司生物發(fā)光的胰腺癌細胞）

胰腺癌原位接種，檢測地點為中國科學院，所用儀器為Lumina Ⅱ。