D-Luciferin 是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，對螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠光進行催化。該反應(yīng)產(chǎn)生的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達到峰值，當?shù)孜餆晒馑剡^量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子篩選的常用報告基因?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)實際上是無背景的，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。在標準熒光計數(shù)儀中可以可靠地測量到 0.02 pg 的熒光素酶。除了用于基因表達的外，熒光素酶還用于 ATP 的檢測。MCE提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004) 、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B) 

    1. 操作前注意事項
a) D-Luciferin 在 100 mM 的水性緩沖液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。儲備溶液可在不含 ATP 的水中制成，并儲存在 -20℃ 的溫度下，以防光線照射。游離酸必須用適當?shù)膲A中和以溶解。在較高的 pH 值下，熒光素經(jīng)歷堿催化的脫氫脲醛生成，以及外消旋成L-異構(gòu)體。
b) D-Luciferin 可用于任何現(xiàn)有的報告基因檢測或 ATP 檢測系統(tǒng)。
c) 如果檢測 ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，盡量減少所有可能的 ATP 污染源。只使用無菌的不含 ATP 的水和試劑。所有試劑制劑使用蒸壓水。
2. 實驗操作
此說明僅提供實驗參考，具體實驗方法根據(jù)您的具體實驗進行更改。
2.1 體外成像實驗示例
a) 在無菌水中制備100 mM (100-200X) 熒光素儲備溶液 拌勻。立即使用或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽光下。
b) 在預(yù)熱過的組織培養(yǎng)液中配制 0.5-1 mM D-Luciferin 工作液
c) 除去細胞中的培養(yǎng)基。
d) 在細胞中加入 D-Luciferin 工作液，成像前 37℃ 孵育細胞 5-10 分鐘。
2.2 體內(nèi)成像實驗示例
a) 在 DPBS 中制備 15 mg/mL 熒光素儲備溶液，不含 Mg²⁺ 和 Ca²⁺ 拌勻。
b) 過濾器通過 0.2μm 過濾器對溶液進行滅菌。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽光下。
c) 成像前 10-15 分鐘，以 150 mg/kg (或 10 μL/g 熒光素儲備溶液) 的動物體重腹腔注射 D-Luciferin。
注：應(yīng)為每個動物模型進行 D-Luciferin 動力學(xué)研究，以確定峰值信號時間。
2.3 基因檢測實驗示例
a) 在無菌水中制備100 mM 熒光素儲備溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環(huán)，避免暴露在陽光下。
b) 在 25 mM tricine 緩沖液 (pH 7.8) 中制備含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO₄ 的 1 mM D-Luciferin 工作溶液。
c) 用移液管將 5-10 μL 細胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解試劑或緩沖液作為空白對照。
d) 根據(jù)說明，使用熒光素工作溶液為光度計注入底部。
e) 立即注入 200 μL D-Luciferin工作溶液，結(jié)合時間為10秒。