Norisoboldine 通過(guò) cAMP-PKA-NF-κB/Notch1 通路抑制 VEGF 誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移。

內(nèi)皮細(xì)胞的遷移一直被認(rèn)為是治療血管生成相關(guān)疾病的潛在靶點(diǎn)。以前，我們證明了 Norisoboldine （NOR） 是一種從 Radix Linderae 中分離的生物堿化合物，可以通過(guò)選擇性抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移來(lái)顯著抑制滑膜血管生成。
方法和結(jié)果：
在本研究中，我們使用特異性抑制劑評(píng)估了各種途徑在 VEGF 誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移中的重要性。VEGF 誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和發(fā)芽被 H-89 （一種蛋白激酶 A （PKA） 抑制劑） 顯著抑制，但未被其他途徑的抑制劑抑制。NOR 顯著抑制 VEGF 誘導(dǎo)的胞漿內(nèi) cAMP 產(chǎn)生和 PKA 活化，從而下調(diào) PKA 通路下游成分的激活，包括酶 （src、VASP 和 eNOS） 和轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB。此外，NOR 降低了與 IκBα 磷酸化和 p65/IκBα 復(fù)合物破壞相關(guān)的 NF-κB 的轉(zhuǎn)錄激活電位。同時(shí)，NOR 選擇性抑制 p-p65 （ser276） 的表達(dá)，但不抑制 p-p65 （ser536） 或 PKAc 的表達(dá)，表明 PKAc 參與 NOR 對(duì) NF-κB 的調(diào)控。免疫共沉淀和免疫熒光測(cè)定證實(shí) NOR 抑制 PKAc/p65 復(fù)合物的形成，從而降低 p65 （ser276） 磷酸化，從而阻止 p65 與 DNA 結(jié)合。對(duì)接模型表明，NOR 對(duì) PKA 的親和力高于原始 PKA 配體。此外，H-89 改善了 Notch1 激活，但 DAPT （Notch 抑制劑） 未能影響 PKA 激活，這一事實(shí)表明 PKA 可能作用于 Notch1 的上游?？傊?，NOR 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移的抑制作用可歸因于其對(duì) PKA 通路的調(diào)節(jié)，尤其是對(duì) p65/IκBα 復(fù)合物破壞和 PKAc/p65 復(fù)合物形成過(guò)程的調(diào)節(jié)。
結(jié)論：
這些結(jié)果表明，NOR 通過(guò) cAMP-PKA-NF-κB/Notch1 信號(hào)通路抑制 VEGF 誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移。

Norisoboldine 誘導(dǎo)佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞凋亡。

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 （RA） 是一種慢性自身免疫性疾病，其特征是明顯的滑膜炎癥和增生，其中成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞 （FLS） 的生長(zhǎng)和死亡之間可能存在不平衡。Norisoboldine （NOR） 是從 Radix Linderae 分離的生物堿組分中的主要活性成分，先前已被證明可以減輕實(shí)驗(yàn)性 RA 中的關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度。
方法和結(jié)果：
本研究旨在評(píng)價(jià) NOR 對(duì)佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎 （AIA） 大鼠 FLS 增殖和凋亡的影響，以闡明其對(duì) RA 炎性滑膜增生的抑制作用機(jī)制。我們的結(jié)果表明，NOR 對(duì) AIA FLS 表現(xiàn)出促凋亡作用，但僅對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期產(chǎn)生輕微影響。用 NOR 處理 24 小時(shí)后，觀察到 AIA FLS 中 caspase 3 和 caspase 9 的激活以及聚 （ADP-核糖） 聚合酶 （PARP） 的裂解;然而，Caspase 8 仍然不受影響。同時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定顯示 NOR 顯著增加凋亡細(xì)胞的百分比，導(dǎo)致去極化線粒體膜電位的喪失和細(xì)胞色素 C 的釋放。Bax 和 Bcl-2 的表達(dá)也受 NOR 處理的調(diào)節(jié)。此外，p53 蛋白的表達(dá)被 NOR 上調(diào)，用 p53 特異性抑制劑 PFT-α 預(yù)處理可逆轉(zhuǎn) NOR 引起的 FLS 細(xì)胞凋亡增加。
結(jié)論：
這些發(fā)現(xiàn)表明，NOR 誘導(dǎo)的 AIA FLS 細(xì)胞凋亡是通過(guò)線粒體依賴性途徑實(shí)現(xiàn)的，這可能是通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞色素 C 的釋放和調(diào)節(jié) Bax 和 Bcl-2 蛋白的表達(dá)來(lái)介導(dǎo)的，p53 也可能是 NOR 誘導(dǎo)的 AIA FLS 細(xì)胞凋亡所必需的。

Norisoboldine 通過(guò)腺苷 A1 受體減輕炎癥性疼痛。

Norisoboldine （NOR） 是從傳統(tǒng)中藥 Radix Linderae 中分離的芐基異喹啉生物堿。我們以前的研究表明，它產(chǎn)生抗炎和抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。
方法和結(jié)果：
本研究旨在探討 NOR 的鎮(zhèn)痛作用及其在福爾馬林試驗(yàn)和醋酸扭動(dòng)試驗(yàn)中的潛在機(jī)制。 口服 NOR 劑量依賴性地減輕了福爾馬林誘導(dǎo)的第二階段疼痛反應(yīng)，并減少了福爾馬林誘導(dǎo)的爪水腫。它還減少了乙酸誘導(dǎo)的扭動(dòng)反應(yīng)，但對(duì)熱板測(cè)試中的急性熱痛沒(méi)有影響。機(jī)制研究表明，腺苷系統(tǒng)，而不是阿片受體系統(tǒng)，參與 NOR 誘導(dǎo)的抗傷害感受。納洛酮是一種非選擇性阿片受體拮抗劑，對(duì) NOR 誘導(dǎo)的鎮(zhèn)痛作用沒(méi)有影響。然而，咖啡因（一種非選擇性腺苷受體拮抗劑）在第二階段完全逆轉(zhuǎn)了 NOR 在福爾馬林誘導(dǎo)的傷害性反應(yīng)中的鎮(zhèn)痛作用，而 8-環(huán)戊基-1,3-二丙基黃嘌呤 （DPCPX，一種選擇性腺苷 A1 受體拮抗劑）完全抑制了 NOR 誘導(dǎo)的鎮(zhèn)痛在福爾馬林誘導(dǎo)的傷害性反應(yīng)和乙酸誘導(dǎo)的扭動(dòng)反應(yīng)中。此外，NOR 減少了福爾馬林誘導(dǎo)的脊髓中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶和鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶 II 的激活，這也被 DPCPX 阻斷。此外，NOR 通過(guò)腺苷 A1 受體降低小鼠脊髓神經(jīng)元培養(yǎng)物中毛喉素誘發(fā)的環(huán)磷酸腺苷水平。
結(jié)論：
我們的數(shù)據(jù)表明，NOR 通過(guò)與腺苷系統(tǒng)相關(guān)的機(jī)制在炎癥性疼痛中產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。